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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR几个月都扩不出来，急死人了！！！求救
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小明在家

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR几个月都扩不出来，急死人了！！！求救

分子实验新手一个！本想扩增一个3000多bp的基因，根据多个同源基因比对分段一次设计引物对01、02、03、04、05五对，01、02、04、05引物对扩增效果很好，就是03引物对一直扩不出来，加过5%甘油做50-63℃退火温度梯度实验，在50-56℃有与目的片段大小相似条带，但是与其他杂带相比较弱。试过不同引物组合还是没能扩增出来。。。急得很，特向前辈或虫友请教！先谢谢大家了！

附上多序列比对文件以及引物信息（扩增序列A09的1230-4810bp位置，也就是序列CHIFFU在序列A09上的位置）
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  • 附件 1 : 多序列比对.MSD
    • 2014-10-11 22:08:57, 48.48 K
  • 附件 2 : PCR引物对（分段设计）.xls
    • 2014-10-11 22:09:08, 15 K

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1楼 2014-10-11 22:10:00
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