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小明在家

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR几个月都扩不出来,急死人了!!!求救

分子实验新手一个!本想扩增一个3000多bp的基因,根据多个同源基因比对分段一次设计引物对01、02、03、04、05五对,01、02、04、05引物对扩增效果很好,就是03引物对一直扩不出来,加过5%甘油做50-63℃退火温度梯度实验,在50-56℃有与目的片段大小相似条带,但是与其他杂带相比较弱。试过不同引物组合还是没能扩增出来。。。急得很,特向前辈或虫友请教!先谢谢大家了!

附上多序列比对文件以及引物信息(扩增序列A09的1230-4810bp位置,也就是序列CHIFFU在序列A09上的位置)
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  • 附件 1 : 多序列比对.MSD
  • 2014-10-11 22:08:57, 48.48 K
  • 附件 2 : PCR引物对(分段设计).xls
  • 2014-10-11 22:09:08, 15 K

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