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努力从容1s

银虫 (小有名气)

[求助] 肿瘤干细胞培养遇到问题了,望众多虫友不吝赐教! 已有2人参与

养肿瘤干细胞的前辈们,lz培养大肠癌干细胞遇到一些问题,不知道你们以前遇到过吗?
    1、不加血清的培基分离肿瘤干细胞:由于干细胞只是很小一部分,种到培养瓶中的细胞大多数都要死亡,只有少数自我更新成球。原代培养肿瘤干细胞长得时间比较长,我的培养瓶中会出现黑色圆圆的东西,培基还是很清澈的,那些是细胞碎片吗?大家原代细胞状态是怎么样的?
    1.用不加血清的培基分离肿瘤干细胞后,3-5天成球,一周后我传代种板做细胞试验,但问题是传代后,培养瓶细胞长得很慢,死细胞也很多,是消化损伤到干细胞造成的吗?(我是这样传代的,先收集悬浮细胞,800r/min离心5min,弃上清,PBS重悬清洗,再离心弃上清,加0.05%TE消化30秒,终止消化,离心用不含血清的全培重悬,然后接种到培养瓶中和用于细胞试验。)你们是怎么传代的?
    2、细胞试验中,96孔板里面细胞只长48h,这样短的时间传代的细胞正常生长是什么状态呢?应该不能成球吧,我检测的不加药的细胞活性很低很低,真是伤心啊!是哪里出问题了呢?
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像名字一样努力从容
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一口吃到肉

新虫 (小有名气)

楼主,我也打算做肿瘤干细胞。请问是直接把肿瘤组织消化后接种在无血清培养基中么?这样是不是只有肿瘤干细胞能生长/?有没有其他注意事项呢?求告知。谢谢
养原代肿瘤干细胞的娃,求经验,求交流~
13楼2017-03-22 14:38:32
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