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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取不出来
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yanggoing

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取不出来 已有3人参与

最近新购买了大肠杆菌，里面的质粒怎么也提取不出来。还麻烦高手帮我看看是什么原因所致。加了抗生素能生长，且也没有污染杂菌。提取过程如下，挑取单菌落于1ml LB培养基培养4小时，后转移50ul至25ml LB中过夜培养，菌量也看过，没有问题。用的是天根试剂盒提取，步骤都是按它上面的做，后面检测总是没有条带。请各位高手帮我看看是什么原因，谢谢
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1楼 2014-10-08 10:57:01
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qiahaoo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by qiahaoo at 2014-10-10 13:20:48
之前提质粒也提不出后来发现是用试剂盒提的时候裂解不充分，后来就在说明书的基础上适当增加裂解时间就好了

说明书是5分钟，我是根据说明书上裂解完全的那个颜色指示来确定的，由半透亮变为透亮蓝色
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18楼2014-10-12 12:56:23
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生物是个坑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yanggoing: 金币+5 2014-10-08 21:02:26
提完建议测下浓度，你说的检测是跑的电泳？按照你的秒杀若是操作没有问题那么换换试剂盒或者是传统方法SDS碱裂解法做一次试试。
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2楼2014-10-08 15:49:04
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白风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议换个试剂盒试试。
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3楼2014-10-08 16:29:53
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，你的大肠杆菌确实里面有质粒对吗？？？
没有用过天根的试剂盒，我们用的索莱宝，不过试剂盒的问题应该不是主要的吧？？没过期吧？？溶液I加入酶了吗？
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4楼2014-10-08 19:09:02
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