应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用链霉菌菌丝体做结合转移得不到结合子，求大神指点？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
31/1返回列表
查看: 1653  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

洛洛丫头

新虫 (初入文坛)

[求助] 用链霉菌菌丝体做结合转移得不到结合子，求大神指点？

我是用pkc1139质粒构建的载体，转化入大肠杆菌ET12567( pUZ8002)中，与波塞链霉菌进行结合转移，基本方法如下：
将链霉菌从斜面接种于50mLTSB培养基中,28℃震荡培养达到对数生长后期, 离心收集菌丝( 4000r/min, 10min, 4% ), 洗涤后重悬于20mLLB培养基中, 作为受体菌; 将质粒分别转化Ecoli ET12567( pUZ8002)感受态细胞, 将阳性转化子接种于LB培养基(含Apr50g/mL、卡那霉素 25 g/mL、氯霉素25g/mL), 37%振荡培养12h, 2%接种于50mLLB液体培养基中(含Apr50g/mL、卡那霉素25g/mL、氯霉素25g/mL), 37% 振荡培养至A600达到04~ 06, 离心收集菌丝并洗涤后, 将菌丝重悬于1~2mLLB培养基中, 作为供体菌; 取适量供体菌与受体菌混匀, 并均匀涂布于MS培养基平板, 28%静置培养20h后加盖抗生素(Apr与奈啶酮酸终浓度均为50g/mL), 37℃ 静置培养7d, 挑取阳性接合子。
我已经做了好几个月了，还是没有长结合子，求高人指点？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-09-29 09:38:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gggracezhang

新虫 (初入文坛)
我们会在MS培养基中加镁离子，10mm
赞一下 回复此楼
2楼2015-12-29 15:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LJ_0824

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gggracezhang at 2015-12-29 15:18:41
我们会在MS培养基中加镁离子，10mm

我想问一下你们MS培养基中加的氯化镁是怎么加进去的呀？是在配培养基的时候加还是倒平板的时候加还是倒好平板以后用氯化镁溶液铺在平板上啊？
赞一下 回复此楼
3楼2016-10-10 14:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 洛洛丫头 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +10 梁梁校校 2026-04-01 10/500 2026-04-03 07:47 by sunshine0013
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +32 洛神哥哥 2026-03-31 34/1700 2026-04-03 07:32 by arrow8852
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂 +10 吃的不少 2026-04-02 10/500 2026-04-02 22:58 by 马儿快快地跑
[考研] 材料专硕322分 +10 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-02 10/500 2026-04-02 21:46 by dongzh2009
[考研] 一志愿复旦材料，英一专硕，总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +7 零八# 2026-03-28 7/350 2026-04-02 21:09 by 1104338198
[考研] 301求调剂 +4 细胞相关蛋白 2026-04-02 8/400 2026-04-02 16:30 by 271179835
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +6 1段时间 2026-03-31 7/350 2026-04-02 13:57 by 3041
[考研] 298求B区调剂 +4 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-02 12:17 by 土木硕士招生
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 303求调剂 +8 DLkz1314. 2026-03-30 8/400 2026-04-02 09:08 by sanrepian
[考研] 材料求调剂 +8 呢呢妮妮 2026-04-01 8/400 2026-04-02 07:13 by yjolah
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
[考研] 283求调剂 +9 A child 2026-03-28 9/450 2026-04-01 14:20 by Jaylen.
[考研] 调剂申请 +8 张张张张zy 2026-03-31 9/450 2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +6 小小机灵虫 2026-03-29 12/600 2026-03-31 16:58 by 记事本2026
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭