| 查看: 1811 | 回复: 2 | ||
[求助]
用链霉菌菌丝体做结合转移得不到结合子，求大神指点？
|
|
我是用pkc1139质粒构建的载体，转化入大肠杆菌ET12567( pUZ8002)中，与波塞链霉菌进行结合转移，基本方法如下： 将链霉菌从斜面接种于50mLTSB培养基中,28℃震荡培养达到对数生长后期, 离心收集菌丝( 4000r/min, 10min, 4% ), 洗涤后重悬于20mLLB培养基中, 作为受体菌; 将质粒分别转化Ecoli ET12567( pUZ8002)感受态细胞, 将阳性转化子接种于LB培养基(含Apr50g/mL、卡那霉素 25 g/mL、氯霉素25g/mL), 37%振荡培养12h, 2%接种于50mLLB液体培养基中(含Apr50g/mL、卡那霉素25g/mL、氯霉素25g/mL), 37% 振荡培养至A600达到04~ 06, 离心收集菌丝并洗涤后, 将菌丝重悬于1~2mLLB培养基中, 作为供体菌; 取适量供体菌与受体菌混匀, 并均匀涂布于MS培养基平板, 28%静置培养20h后加盖抗生素(Apr与奈啶酮酸终浓度均为50g/mL), 37℃ 静置培养7d, 挑取阳性接合子。 我已经做了好几个月了，还是没有长结合子，求高人指点？ |
回复此楼» 猜你喜欢
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有59人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
gggracezhang
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 232.5
- 帖子: 7
- 在线: 10.5小时
- 虫号: 3317613
- 注册: 2014-07-10
- 专业: 药物学其他科学问题
2楼2015-12-29 15:18:41
3楼2016-10-10 14:12:57