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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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洛洛丫头

新虫 (初入文坛)

[求助] 用链霉菌菌丝体做结合转移得不到结合子，求大神指点？

我是用pkc1139质粒构建的载体，转化入大肠杆菌ET12567( pUZ8002)中，与波塞链霉菌进行结合转移，基本方法如下：
将链霉菌从斜面接种于50mLTSB培养基中,28℃震荡培养达到对数生长后期, 离心收集菌丝( 4000r/min, 10min, 4% ), 洗涤后重悬于20mLLB培养基中, 作为受体菌; 将质粒分别转化Ecoli ET12567( pUZ8002)感受态细胞, 将阳性转化子接种于LB培养基(含Apr50g/mL、卡那霉素 25 g/mL、氯霉素25g/mL), 37%振荡培养12h, 2%接种于50mLLB液体培养基中(含Apr50g/mL、卡那霉素25g/mL、氯霉素25g/mL), 37% 振荡培养至A600达到04~ 06, 离心收集菌丝并洗涤后, 将菌丝重悬于1~2mLLB培养基中, 作为供体菌; 取适量供体菌与受体菌混匀, 并均匀涂布于MS培养基平板, 28%静置培养20h后加盖抗生素(Apr与奈啶酮酸终浓度均为50g/mL), 37℃ 静置培养7d, 挑取阳性接合子。
我已经做了好几个月了，还是没有长结合子，求高人指点？
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1楼 2014-09-29 09:38:14
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gggracezhang

新虫 (初入文坛)
我们会在MS培养基中加镁离子，10mm
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2楼2015-12-29 15:18:41
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LJ_0824

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gggracezhang at 2015-12-29 15:18:41
我们会在MS培养基中加镁离子，10mm

我想问一下你们MS培养基中加的氯化镁是怎么加进去的呀？是在配培养基的时候加还是倒平板的时候加还是倒好平板以后用氯化镁溶液铺在平板上啊？
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3楼2016-10-10 14:12:57
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