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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 换载体，pET21a换成pET32a的酶切位点问题
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蠹鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jian212 at 2014-09-29 15:39:44
换成PET-32的话位点可以用的。

什么意思，直接酶切连接就行？
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少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
11楼2014-09-29 16:02:20
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可帅儿

银虫 (正式写手)
★
蠹鱼(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:48:50
引用回帖:
8楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-29 15:37:43
结果是什么样子，不可行？...

位点不唯一你就不知道目的序列连在载体哪一段了，转化下来的效率也很低。一般都选在多克隆区域的位点
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追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
12楼2014-09-29 16:46:31
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
蠹鱼: 金币+1 2014-09-30 08:45:12
蠹鱼: 金币+2 2014-09-30 08:50:53
引用回帖:
11楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-29 16:02:20
什么意思，直接酶切连接就行？...

恩，可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧，不影响的。
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学习再学习，努力再努力。
13楼2014-09-29 16:50:52
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蠹鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jian212 at 2014-09-29 16:50:52
恩，可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧，不影响的。...

您和人家回复的都不一样，更给详细的说明吗？
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少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
14楼2014-09-30 08:44:36
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蠹鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jian212 at 2014-09-29 16:50:52
恩，可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧，不影响的。...

HindIII  1  173
NdeI    2   346  691
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少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
15楼2014-09-30 08:50:26
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-30 18:34:43
蠹鱼: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-30 19:30:49
引用回帖:
15楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-30 08:50:26
HindIII  1  173
NdeI    2   346  691...

PDF 上传不了，你可以查下PET-32 的图谱，NdeI 之间是一个
Trx•Tag coding sequence 366-692
切掉的话对你没什么影响的。
你用NdeI 和HindIII 酶切保留的是 173 、691 位的位点，中间部分切掉了。所以对你没什么影响的。
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学习再学习，努力再努力。
16楼2014-09-30 10:50:54
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dychad

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
蠹鱼: 金币+4, ★有帮助 2014-11-09 17:18:43
不表达的原因很多，首先，有没有测序啊，进行测序看看，是不是出发点的基因出现了错误；然后，换一换宿主和载体，这是常用的套路，理论上用酶切是可以的，但是要设计好。
PBAD不知道，查一查资料吧
祝实验顺利！
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17楼2014-11-09 17:17:46
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蠹鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by dychad at 2014-11-09 17:17:46
不表达的原因很多，首先，有没有测序啊，进行测序看看，是不是出发点的基因出现了错误；然后，换一换宿主和载体，这是常用的套路，理论上用酶切是可以的，但是要设计好。
PBAD不知道，查一查资料吧
祝实验顺利！

啥套路？
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少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
18楼2014-11-09 17:18:56
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dychad

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
蠹鱼: 金币+12, ★有帮助 2014-11-09 17:20:57
引用回帖:
18楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-11-09 17:18:56
啥套路？...

设计引物，PCR，换酶切位点
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19楼2014-11-09 17:20:35
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蠹鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by dychad at 2014-11-09 17:20:35
设计引物，PCR，换酶切位点...

老笼统，反正也没有别人回复，都给你把
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少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
20楼2014-11-09 17:21:20
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