【答案】应助回帖

少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。

11楼2014-09-29 16:02:20

可帅儿

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★
蠹鱼(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:48:50

引用回帖:

8楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-29 15:37:43
结果是什么样子，不可行？...

位点不唯一你就不知道目的序列连在载体哪一段了，转化下来的效率也很低。一般都选在多克隆区域的位点

追随自己的心！不要做让自己后悔的事！

12楼2014-09-29 16:46:31

jian212

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
蠹鱼: 金币+1 2014-09-30 08:45:12
蠹鱼: 金币+2 2014-09-30 08:50:53

引用回帖:

11楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-29 16:02:20
什么意思，直接酶切连接就行？...

恩，可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧，不影响的。

学习再学习，努力再努力。

13楼2014-09-29 16:50:52

蠹鱼

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引用回帖:

13楼: Originally posted by jian212 at 2014-09-29 16:50:52
恩，可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧，不影响的。...

您和人家回复的都不一样，更给详细的说明吗？

少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。

14楼2014-09-30 08:44:36

蠹鱼

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引用回帖:

13楼: Originally posted by jian212 at 2014-09-29 16:50:52
恩，可以直接酶切连接的。NdeI 在同一侧，不影响的。...

HindIII 1 173
NdeI 2 346 691

少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。

15楼2014-09-30 08:50:26

jian212

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-30 18:34:43
蠹鱼: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-30 19:30:49

引用回帖:

15楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-30 08:50:26
HindIII 1 173
NdeI 2 346 691...

PDF 上传不了，你可以查下PET-32 的图谱，NdeI 之间是一个
Trx•Tag coding sequence 366-692
切掉的话对你没什么影响的。
你用NdeI 和HindIII 酶切保留的是 173 、691 位的位点，中间部分切掉了。所以对你没什么影响的。

学习再学习，努力再努力。

16楼2014-09-30 10:50:54

dychad

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
蠹鱼: 金币+4, ★有帮助 2014-11-09 17:18:43

不表达的原因很多，首先，有没有测序啊，进行测序看看，是不是出发点的基因出现了错误；然后，换一换宿主和载体，这是常用的套路，理论上用酶切是可以的，但是要设计好。
PBAD不知道，查一查资料吧
祝实验顺利！

17楼2014-11-09 17:17:46

蠹鱼

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引用回帖:

17楼: Originally posted by dychad at 2014-11-09 17:17:46
不表达的原因很多，首先，有没有测序啊，进行测序看看，是不是出发点的基因出现了错误；然后，换一换宿主和载体，这是常用的套路，理论上用酶切是可以的，但是要设计好。
PBAD不知道，查一查资料吧
祝实验顺利！

啥套路？

少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。

18楼2014-11-09 17:18:56