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蠹鱼

木虫 (正式写手)

[求助] 换载体,pET21a换成pET32a的酶切位点问题已有4人参与

用Nde I 和Hind III 双酶切目的片段以及空载体pET21a,构建了一个重组质粒来表达一个酶,但是至今未表达。可能是那是出现了问题呢?
        我想换个载体,用pET32试一下。Hind III 只有一个酶切位点,可以沿用。但是pET32上有2个Nde I 的切割位点,这样可以吗?会不会切的乱七八糟的?应不应该设计引物,PCR重新构建酶切位点呢?
        刚刚进实验室,恳请大家多多指点。
        另外,我还想换成pBAD质粒,这个酶切位点怎么选,怎么办?
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少一分浮躁,多一分踏实。少一分侥幸,多一分努力。
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可帅儿

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蠹鱼: 金币+1 2014-09-29 15:38:01
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-09-30 18:33:59
只要你加了NdeI那2个位点都会切开~你上网查查载体图谱,看下有其他共用位点没?
追随自己的心!不要做让自己后悔的事!
6楼2014-09-29 13:46:31
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可帅儿

银虫 (正式写手)


蠹鱼(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:48:50
引用回帖:
8楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-09-29 15:37:43
结果是什么样子,不可行?...

位点不唯一你就不知道目的序列连在载体哪一段了,转化下来的效率也很低。一般都选在多克隆区域的位点
追随自己的心!不要做让自己后悔的事!
12楼2014-09-29 16:46:31
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