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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有8人参与

用镍柱进行蛋白纯化时,首先要获得菌体后裂解细胞,我选择的是超声破碎,我的蛋白是包涵体,但是我每次超声完后原来浑浊的菌体溶液都会变得清亮透明,离心以后几乎没有沉淀,不知道是怎么回事?难道是我超声的力度太大了,把包涵体都超声没啦?新手 请多帮忙
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shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是因为你加的尿素把包涵体溶解了,所以看不到沉淀。你可以这样,先把菌体用Tris-HCL缓冲液(pH8.0,不含尿素)悬浮,超声破碎后离心,去上清,沉淀用含8M 尿素的 20mM Tris-HCL,0.5M Nacl,pH8.0的缓冲液(为提高重组蛋白纯度,可在此缓冲液中加入10-40mM 咪唑)溶解。过滤后上镍柱纯化。
24楼2014-09-29 09:11:40
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