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小孽博士

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白全长定位于细胞质中,但是分段表达后则变为核质都有 已有2人参与

如题目,我的全长蛋白融合GFP只在细胞质中定位,但是分三段后再融合GFP则在细胞质,细胞核中都有定位。全长蛋白在动物的研究发现是转录激活因子以及RNA 诱导的沉默复合体的组分,在植物中有报道说是微管骨架结合蛋白以及RNA结合蛋白。 现在不知道该怎么解释分段表达后这种亚细胞定位的变化,各位虫友有知道的吗?不胜感激呢~
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千磨万击还坚劲,任尔东西南北风
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小孽博士

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhenxiangkai at 2014-09-24 08:05:45
非常有意思啊 你的是什么蛋白?你的GFP 只是在一端吗、?建议你在另一端加一个不同的标签,看看是不是全长的蛋白都有在你说的地方定位。

我的GFP标签是加在C端,N端的没有做,现在不知道怎么分析这个结果~
千磨万击还坚劲,任尔东西南北风
3楼2014-09-24 09:23:49
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zhenxiangkai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小孽博士: 金币+5, 有帮助 2014-09-24 09:26:06
非常有意思啊 你的是什么蛋白?你的GFP 只是在一端吗、?建议你在另一端加一个不同的标签,看看是不是全长的蛋白都有在你说的地方定位。
2楼2014-09-24 08:05:45
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小孽博士: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-24 14:45:32
可能性1: 你全长有NLS(nuclear localization signal)或者NES(nuclear export signal),你把蛋白分段以后没有NES的片段就跑到细胞核内部了,或者有NLS的片段就跑到细胞核内部了。
可能性2: 你把蛋白分段以后,蛋白的尺寸变小,可以通过核孔自由扩散到细胞核里
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2014-09-24 10:16:54
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小孽博士

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-09-24 10:16:54
可能性1: 你全长有NLS(nuclear localization signal)或者NES(nuclear export signal),你把蛋白分段以后没有NES的片段就跑到细胞核内部了,或者有NLS的片段就跑到细胞核内部了。
可能性2: 你把蛋白分段以后,蛋白 ...

首先谢谢你。对于第二种可能性,我也考虑过。不过三段分段蛋白再加上GFP,最小的也有42KD,远远大于核孔允许自由扩散的蛋白分子量。而对于第一种可能性,我还是有疑问,因为分三段之后,这三段蛋白都能定位到核中,但是全长蛋白是没有细胞核定位的。刚百度了一下,NLS是蛋白质上的一段氨基酸序列。那意思是全长蛋白没有NLS,而分段之后都有了NLS?感觉这不符合逻辑呢PS本人有点笨,还请兄台再指教一二~
千磨万击还坚劲,任尔东西南北风
5楼2014-09-24 14:59:09
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