应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 蛋白全长定位于细胞质中，但是分段表达后则变为核质都有
101/1返回列表
查看: 1227  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小孽博士

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白全长定位于细胞质中，但是分段表达后则变为核质都有 已有2人参与

如题目，我的全长蛋白融合GFP只在细胞质中定位，但是分三段后再融合GFP则在细胞质，细胞核中都有定位。全长蛋白在动物的研究发现是转录激活因子以及RNA 诱导的沉默复合体的组分，在植物中有报道说是微管骨架结合蛋白以及RNA结合蛋白。 现在不知道该怎么解释分段表达后这种亚细胞定位的变化，各位虫友有知道的吗？不胜感激呢~
回复此楼

» 猜你喜欢
千磨万击还坚劲，任尔东西南北风
1楼 2014-09-23 21:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenxiangkai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小孽博士: 金币+5, ★有帮助 2014-09-24 09:26:06
非常有意思啊 你的是什么蛋白？你的GFP 只是在一端吗、？建议你在另一端加一个不同的标签，看看是不是全长的蛋白都有在你说的地方定位。
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-24 08:05:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小孽博士

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhenxiangkai at 2014-09-24 08:05:45
非常有意思啊 你的是什么蛋白？你的GFP 只是在一端吗、？建议你在另一端加一个不同的标签，看看是不是全长的蛋白都有在你说的地方定位。

我的GFP标签是加在C端，N端的没有做，现在不知道怎么分析这个结果~
赞一下 回复此楼
千磨万击还坚劲，任尔东西南北风
3楼2014-09-24 09:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小孽博士: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-24 14:45:32
可能性1： 你全长有NLS(nuclear localization signal)或者NES(nuclear export signal)，你把蛋白分段以后没有NES的片段就跑到细胞核内部了，或者有NLS的片段就跑到细胞核内部了。
可能性2： 你把蛋白分段以后，蛋白的尺寸变小，可以通过核孔自由扩散到细胞核里
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2014-09-24 10:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小孽博士

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-09-24 10:16:54
可能性1： 你全长有NLS(nuclear localization signal)或者NES(nuclear export signal)，你把蛋白分段以后没有NES的片段就跑到细胞核内部了，或者有NLS的片段就跑到细胞核内部了。
可能性2： 你把蛋白分段以后，蛋白 ...

首先谢谢你。对于第二种可能性，我也考虑过。不过三段分段蛋白再加上GFP，最小的也有42KD，远远大于核孔允许自由扩散的蛋白分子量。而对于第一种可能性，我还是有疑问，因为分三段之后，这三段蛋白都能定位到核中，但是全长蛋白是没有细胞核定位的。刚百度了一下，NLS是蛋白质上的一段氨基酸序列。那意思是全长蛋白没有NLS，而分段之后都有了NLS？感觉这不符合逻辑呢PS本人有点笨，还请兄台再指教一二~
赞一下 回复此楼
千磨万击还坚劲，任尔东西南北风
5楼2014-09-24 14:59:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小孽博士 at 2014-09-24 14:59:09
首先谢谢你。对于第二种可能性，我也考虑过。不过三段分段蛋白再加上GFP，最小的也有42KD，远远大于核孔允许自由扩散的蛋白分子量。而对于第一种可能性，我还是有疑问，因为分三段之后，这三段蛋白都能定位到核中， ...

(1) 关于可以通过的尺寸大小，这个有争议，参看这篇文章： http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S0014579307006485
但是的确，大部分情况下认为42kDa应该就不能自由扩散了
(2) NLS和NES这个情况就比较复杂了，有的蛋白NLS和NES还在一起，所以可以细胞核内外来回穿梭。全长没有NLS，分段后有NLS应该不可能的.
有可能NLS或者NES依赖于一些翻译后的修饰,分段以后就不会被磷酸化之类的修饰了。或者你的蛋白和importin或者exportin相互作用依赖于某个片段的特定功能，分段以后就破坏了结合能力。
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2014-09-25 00:42:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenxiangkai

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小孽博士 at 2014-09-24 09:23:49
我的GFP标签是加在C端，N端的没有做，现在不知道怎么分析这个结果~...

你好，我很菜，可是，我有一些小小的想法，第一，你为什么要分三段？根据是什么？第二，假如是转录因子的话，肯定会入核的，所以，是不是你检测的时间正好在细胞质和细胞核都有，随着时间的推移，大部分就进入细胞核了。有无可能？第三，你这是什么蛋白啊？呵呵 我很好奇
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-25 07:57:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenxiangkai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小孽博士 at 2014-09-24 09:23:49
我的GFP标签是加在C端，N端的没有做，现在不知道怎么分析这个结果~...

我也不太明白，我感觉可能有一下情况。第一，你全长的蛋白是不是要经过某种方式断裂了，一部分进入细胞核，一部分留在细胞质。第二，进入细胞核也是需要时间的，可能你检测的时候正好一部分在细胞质，一部分在细胞核，会不会随着时间的推移，进入细胞核的会增多？第三，我想知道你为什么要分三段？
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-25 08:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小孽博士

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-09-25 00:42:12
(1) 关于可以通过的尺寸大小，这个有争议，参看这篇文章： http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014579307006485
但是的确，大部分情况下认为42kDa应该就不能自由扩散了
(2) NLS和NES这个情况就 ...

受教了，多谢~
回复此楼
千磨万击还坚劲，任尔东西南北风
9楼2014-09-25 15:43:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小孽博士

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhenxiangkai at 2014-09-25 08:01:57
我也不太明白，我感觉可能有一下情况。第一，你全长的蛋白是不是要经过某种方式断裂了，一部分进入细胞核，一部分留在细胞质。第二，进入细胞核也是需要时间的，可能你检测的时候正好一部分在细胞质，一部分在细胞 ...

分段这个数据，还没有发表，所以不方便说，很抱歉。它在动物上是报道有作为转录因子的，并且动物上也是有核定位的。我是做拟南芥，它全长只在细胞质中有。至于分段，也是参考动物上的做的
赞一下 回复此楼
千磨万击还坚劲，任尔东西南北风
10楼2014-09-25 15:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小孽博士 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +5 wasdssaa 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:00 by fmesaito
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 考研调剂 +7 呼呼？~+123456 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:24 by 小小麦片
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭