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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于目的基因导入pet-28a中是否会发生移码问题!
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well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] 关于目的基因导入pet-28a中是否会发生移码问题! 已有4人参与

本人想用pet-28a作为表达载体,引物 已经设计完了,才意识到移码的问题.想问问怎么看我的目的基因导入进28a后是否会发生移码呢?我选的酶切问点分别是BamHI和HindIII, 需要看目的基因序列吗?还是看引物?我在我的酶切位点前面加了2-3个保护碱基:CG GGATCC CG   BamHI
             CCC AAGCTT GGG   HindIII
引物分别是:5`>CG GGATCC CG ATGTCTCTTCGACGTATTCTC<3`
                   5`>CCC AAGCTT GGGTCAGCAGTACAGGTTGCC<3`
如果发生移码了,是不是需要从新设计引物P目的基因序列?
下面是CDS序列,新手,勿怪!

ATGTCTCTTC GACGTATTCT CGCGGCGGTCGCCGCCACCTTCGCCGCCACCACGGTCGCCGTGGTCGTCC
CGACGCAGTCCGCCTCCGCCGCGGACTGCGTGGCGCCGTGGAACGCGAGTTCGGTCTACTGGGGCGGCAA
CACCGCGTCCTACAACGGGCACAACTGGTCCGCGAAGTGGTGGACGCAGAACGAAACCCCAGGTGCAGCG
CAGGTCTGGGCCGATCAGGGCGCCTGCGGCGGCGGGACGACCAACCCGCCGAACCCGTCCGGCTTCGTGG
ACAGTTCAACCAGATGTTCCCGAGCCGGAATCCCTTCTACACCTACAACGGCCTGGTCAC
CGCGCTCAGCGCCTACCCGGCCTTCGCGGGCACGGGCAGCGACACCGTGAAGAAGCAGGAAGCGGCGGCC
TTCCTGGCGAACGTCAGCCACGAGACCGGCGGACTGGTCCACATCGTCGAGCAGAACGAAGCGAACTACC
CGCACTACTGCGACACGAGCCAGTCCTACGGCTGCCCCGCCGGCAACGCCGCGTACTACGGCCGCGGCCC
GATCCAGCTCAGCTGGAACTTCAACTACAAGGCCGCCGGCGACGCGCTCGGCCTGCCACTGCTGACCAAC
CCGTGGCTGGTGCAGAACGACGCGGCGGTCGCCTGGAAGACCGGCATCTGGTACTGGATGACCCAGAACG
GTCCCGGCACGATGACCCCGCACAACGCGATGGTCAACAGCCGCGGCTTCGGCGAGACGATCCGCAGCAT
CAACGGGAGCATCGAGTGCAACGGCGGCAACCCCGCCCAGGTGCAGAGCCGCGTGAACAAGTACCAGCAG
TTCACCGGCATCCTCGGCGTCACCCCCGGCGGCAACCTGTACTGCTGA
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1楼 2014-09-22 20:58:14
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 393658000 at 2014-09-24 09:20:23
不懂为何你要在BamHI中间塞入碱基，因为你既然选择了BamHI作为第一个酶，那么你就默认了需要用到载体本身上的5‘His,这样的话你的第一条引物塞入了2个碱基，所以后面ORF肯定移码，你要么不塞，要么塞3的倍数，但是个 ...

谢谢前辈的指教，我们老师要求加入保护碱基，本来我也是不打算加的，不过查阅资料说加入保护碱基后酶切时会更高效地切开。
赞一下 回复此楼
11楼2014-10-01 22:47:57
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
well_想太多: 金币+1, ★有帮助 2014-09-23 13:42:38
本帖内容被屏蔽
2楼2014-09-23 09:21:18
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whh2013

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新扩吧，和我一样的问题，
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-23 11:03:21
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whh2013

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你不是从ATG扩的吗？这样没有没有问题啊
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-23 11:05:49
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