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宁静de夏

金虫 (正式写手)

[求助] 测定多糖分子量的色谱条件,各个峰的分离度需要很好吗 已有2人参与

GPC测定多糖分子量时,根据保留时间得出待测物分子量,那色谱条件需要能将分子量接近的峰完全分开吗?还是峰有部分重叠也可以呢?

另外,葡聚糖对照品是通用对照品吗?

求大神~~~~
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
宁静de夏: 金币+2, ★★★很有帮助, 3Q ~~~ 2014-09-15 11:25:23
尽可能的分开吧,如果只是想要大致的分子量,峰有部分重叠不会有太大的影响。
需要一系列分子量的标品去做标准曲线,要看你目标物分子量的分布范围来定。标品不只有葡聚糖的,还有其他的,看需要来定
人生若只如初见...
2楼2014-09-11 10:18:23
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宁静de夏

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by daisyzhangwei at 2014-09-11 10:18:23
尽可能的分开吧,如果只是想要大致的分子量,峰有部分重叠不会有太大的影响。
需要一系列分子量的标品去做标准曲线,要看你目标物分子量的分布范围来定。标品不只有葡聚糖的,还有其他的,看需要来定

目标物分子量大概20万左右,我选葡聚糖分子量4万到40万的五个点是不是可以呢?
走标品的时候都是单个单个走,不存在峰分没分开的问题,走样品时两个峰有部分重叠可以吗?
另外刚开始摸条件时是用样品摸吗?色谱条件一般需要达到什么程度呢?
第一次做分子排阻色谱,还请多多指教~~
3楼2014-09-11 10:40:57
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
宁静de夏: 金币+3, ★★★很有帮助, 3Q~~ 2014-09-15 11:25:34
1、理论上,应该是分离度达到要求最好,如果分离有干扰,也会干扰结果。
2、大概知道分子量,你可以在已知分子量周围的点多些,其他的远些,不建议点平均排开。
4楼2014-09-11 11:24:23
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宁静de夏

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-09-11 11:24:23
1、理论上,应该是分离度达到要求最好,如果分离有干扰,也会干扰结果。
2、大概知道分子量,你可以在已知分子量周围的点多些,其他的远些,不建议点平均排开。

请问摸条件时,样品保留时间多少合适呢?如果样品中两个多糖的分子量很接近,分不开是不是就要考虑两根柱子串联了?
5楼2014-09-12 10:13:19
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 宁静de夏 at 2014-09-12 10:13:19
请问摸条件时,样品保留时间多少合适呢?如果样品中两个多糖的分子量很接近,分不开是不是就要考虑两根柱子串联了?...

可以这么考虑,但是串联又会受柱压的限制。如果能达到分离度,还是可以的。

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6楼2014-09-12 13:51:44
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宁静de夏

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-09-12 13:51:44
可以这么考虑,但是串联又会受柱压的限制。如果能达到分离度,还是可以的。
...

请问这种方法是不是每次测分子量都得做标曲呢?还是证明一定范围内线性好之后可以用外标一点法呢?
7楼2014-09-12 15:08:44
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 宁静de夏 at 2014-09-12 15:08:44
请问这种方法是不是每次测分子量都得做标曲呢?还是证明一定范围内线性好之后可以用外标一点法呢?...

理论上每次都要重新配,但是一般都是可以用几次的,除非仪器维修过或者长时间不用

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-09-12 20:41:38
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看你行不行

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by daisyzhangwei at 2014-09-11 10:18:23
尽可能的分开吧,如果只是想要大致的分子量,峰有部分重叠不会有太大的影响。
需要一系列分子量的标品去做标准曲线,要看你目标物分子量的分布范围来定。标品不只有葡聚糖的,还有其他的,看需要来定

可以留下联系方式不,qq,微信都行,想咨询下您有关多糖分子量的问题,谢谢
坚挺的活着,相信美好的未来
9楼2015-03-10 16:06:21
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