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如何用CFDASE探针测定细菌胞内PH值？
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最近需要测定阪崎肠杆菌胞内的ph值，请问哪位大神亲自做过这方面的实验~~ 我用的方法是用CFSE荧光染料（东仁化学科技），但是做了几次标准曲线，发现加了染料和不加染料的荧光强度没有什么差别。。。。 以下是我做标曲的方法: 1、 离心后收集细菌 2、 用包含50mmol/l EDTA的5mmol/l HEPES（ph 8）洗涤3次 3、 用包含1.5umol/l CFDASE的50mmol/l 磷酸盐缓冲液重新悬浮细菌，30℃孵育10分钟 4、 用50mmol/l的磷酸钾（ph 5.8）洗涤1次 5、 用10mmol/l的葡萄糖溶液30℃ 孵育30min 6、 用50mmol/l的磷酸钾洗涤 重新悬浮 之后将处理好的细菌置于不同ph值的缓冲液下（加了缬氨霉素和尼日利亚菌素），激发波长490nm 检测波长520nm测荧光强度，制作标准曲线。 |
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