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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组蛋白在BL21(DE3)中表达，存在包涵体
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白在BL21(DE3)中表达，存在包涵体 已有3人参与

我的酶在大肠杆菌中表达后，刚开始表达酶活很高，SDS-PAGE显示蛋白在上清液中，后来某一天酶活突然下降，降到原始酶活的1/3左右，重新转化筛选仍没有效果，SDS-PAGE显示上清中的蛋白量减少了，而破碎后的沉淀中存在很多，这应该是以包涵体的形式存在吧？每次的发酵条件都一样，为什么刚开始没有而后来出现了呢？有什么解决方法吗？希望各位虫友不吝赐教
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1楼 2014-09-05 19:09:22
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by liuxiuaza at 2014-12-01 12:06:09
最好不要这样，我都是划线培养个板子，每次挑一个单克隆至5mL LB培养基中，先摇16个小时活化，然后拿活化的菌液接种，再诱导...

那这样怎么保证每次的最高酶活都差不多呢？而且划了板子不久相当于传代了么
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11楼2014-12-02 11:49:40
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小小cool

金虫 (正式写手)
菌种退化了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-05 20:54:14
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-09-05 20:54:14
菌种退化了

可是重新转过筛选过啊
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3楼2014-09-05 21:24:00
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俗妮儿~

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-06 19:16:19
应该不是蛋白表达的问题，你确定每次发酵条件都一样？
看你的情况好像是蛋白产量太高，在菌体内大量积累就形成了包涵体。
干脆重新优化一下发酵条件吧，比如说温度时间什么的，再不行就试试分子伴侣质粒，这个东东有助于蛋白的折叠。
祝你实验顺利！
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4楼2014-09-06 12:19:35
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