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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何保证菌的接种量一致？？？
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helenfang

铜虫 (小有名气)
看到这么多朋友给我建议我真的很感动，也很感谢。。我把我实验过程说详细点，仍然希望大家关注我这个问题。。
我的实验菌株是硅酸盐细菌，为筛选产酸量高的菌株。最终是希望通过测量培养前后培养基的pH变化来衡量产酸多少，现在关键问题是无法使初始菌量相当。我是想先挑菌到液体培养基中先生长一天，再吸取一部分到产酸培养基中的，本想通过OD值来调整加入的菌液的量，但是结果好像OD不能真正反应菌量的多少，虽然都是一个属的菌，但好像菌体大小还是有的相差比较大，这些应该都会影响OD和菌量的对应关系。希望大家继续给我建议，用什么方法来调整初始菌量相当比较好呢，不是重复实验，而是征对很多菌的筛选实验。谢谢。。。
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21楼2008-04-26 19:40:31
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钉木房子

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我以前做过菌种筛选，保证接种量的一致是很重要，但没有到你这种地步，因为菌体大小肯定是有偏差的，不同菌种的菌量用OD来测没什么意义。我把以前做实验的步骤列出来，仅供参考。首先把实验菌株涂平板，得到单菌落，挑选多个具有代表性的单菌落到等量相同液体培养基中培养，如果菌液太浓可以增加一步扩大培养的步骤，再吸取等体积的菌液到目的培养基中，剩余的菌液保存，可用来做重复实验及菌种保存。
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22楼2008-04-28 09:57:00
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ribisome

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
我们做的时候都是先挑一定量菌到种子培养基,先培养至对数生长期,摇匀,再接种到你想用的培养基,大约就能保持接种量一致
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日子一天天过 路一步步踩.
23楼2008-04-28 10:10:11
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qijilaji

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by helenfang at 2008-4-26 19:40:
我的实验菌株是硅酸盐细菌，为筛选产酸量高的菌株。最终是希望通过测量培养前后培养基的pH变化来衡量 ...

如果是以产酸为目的进行筛选实验的话，实际上是两个方面的问题，一是菌体的繁殖能力，另一个是单位产酸能力，最终产酸多的菌株实际上是这两方面能力综合最高的结果，不知道你这么严格控制接种量的目的是什么？如果是为了筛选出单位产酸能力最强的菌株，那么还是需要测定培养过程中的菌数变化才行。如果是只根据最终的PH值变化来判定单位产酸能力的话，我个人觉得还是有问题的。
以前我们做类似实验的时候，通常是只测定接种时和实验结束时的代谢物浓度和菌密度，还是以代谢物的总生成量作为筛选标准，也就是说不去深入研究到底是菌株生长得好还是单位产能高的问题，除非是菌量少得离谱。
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24楼2008-04-28 15:40:46
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
楼主的方法可能不太准确，第一、EP管取得量本来就很少，称重的时候误差本来就比较大，加水量也不容易控制。第二、菌的大小也不一样，同等重量取的菌数不同，在取量很少的情况下这个因素就不好忽略了。建议楼主先用梯度稀释平板测出菌悬液的浓度，用浓度近似相等（控制在可信区间内）的菌悬液的接种就可以了，不过这个方法时间可能稍微长一点吧，但是准确性应该比较高。
这个方法我也没有试过，只是向楼主提一个建议，楼主如果采用麻烦告诉我效果如何啊，谢谢
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
25楼2008-04-28 19:38:27
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helenfang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qijilaji at 2008-4-28 15:40:

如果是以产酸为目的进行筛选实验的话，实际上是两个方面的问题，一是菌体的繁殖能力，另一个是单位产酸能力，最终产酸多的菌株实际上是这两方面能力综合最高的结果，不知道你这么严格控制接种量的目的是什么？如 ...

嘿嘿，这位朋友以前做过的实验可能跟我的有点类似，想跟您多交流下，发了条消息给你，看到一定回我哦
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26楼2008-04-29 12:15:52
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helenfang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 烟大考研 at 2008-4-28 19:38:
楼主的方法可能不太准确，第一、EP管取得量本来就很少，称重的时候误差本来就比较大，加水量也不容易控制。第二、菌的大小也不一样，同等重量取的菌数不同，在取量很少的情况下这个因素就不好忽略了。建议楼主先用 ...

确实稀释平板相对比较精确啦，但是等菌长好了计数完了也知道菌量的时候这个初始菌液也不能用啦，您说是不，菌液没发保存啊，放冰箱的话活性要下降的，所以大概我暂时不会这样来计数啦，谢谢哈
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27楼2008-04-29 12:18:13
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qijilaji

金虫 (小有名气)
已经给你回消息了，有问题再交流吧
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28楼2008-05-01 22:22:10
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