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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何保证菌的接种量一致？？？
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helenfang

铜虫 (小有名气)
请问菌体干重那个怎么弄，不太懂
另外菌液摇至饱和？怎么知道是饱和了？
谢谢
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11楼2008-04-18 19:55:49
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helenfang

铜虫 (小有名气)
我的菌有个特点就是外有荚膜，菌液是比较粘稠的，所以楼上有朋友说的我认为是比较合理的，是应该在液体培养基中培养一段时间测OD值比较合理。帮我看看我这样想可不可行：挑一定量菌至EP管中，制成均匀菌悬液，吸取一定量至试管液体培养基中生长24h，测OD，按OD值的不同来调加入菌液的量使得菌量基本一致。对了，是否可以认为菌量与OD是成正比的呢？谢谢各位帮我解答。
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12楼2008-04-19 10:37:53
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白鹿青崖

铜虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
平板上挑取一定量菌到EP管制成菌悬液，然后吸取一定量到产酸培养基中，我希望理想的状态是不同的菌最终接到产酸培养基中量趋近于一致
做严格的菌液计数,后推算多少浊度有多少菌,计算接种量.
不过生长速度是否一样就不敢保证了
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白鹿青崖
13楼2008-04-23 23:06:45
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helenfang

铜虫 (小有名气)
楼上说的非常正确，我就是另一方面用菌落计数来验证是否和OD测得的结果一致。，但目前还是有新的问题，就是好像计数结果和OD是不对应的，不知道培养基有颜色是不是会导致OD值与菌量不对应关系。
谢谢给位解答。
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14楼2008-04-24 13:20:51
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qijilaji

金虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
你用不同的菌株进行实验的话，OD值一致但是菌量完全可能差很多的，麻烦一点的办法就是全部用计数板数，然后根据密度计算需要接种的菌液体积
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15楼2008-04-24 14:51:49
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SWZ12630

铁虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我们老板告诉我们就是制成菌悬液，混匀后每只培养基中加入相同体积的液体就是了！
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2011结束单身
16楼2008-04-24 20:21:49
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helenfang

铜虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
14楼的朋友说的很有道理，我也是这么感觉的，但是我很想知道我的培养基有颜色的是否会很影响结果，因为我用另一种培养基（只是和前一种C源不同，但灭菌后是无色的）同时培养，也测了OD，测得的OD值大小关系就有些不同，所以我在想是否是颜色也一方面导致了结果的出入。
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17楼2008-04-24 20:46:28
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helenfang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qijilaji at 2008-4-24 14:51:
你用不同的菌株进行实验的话，OD值一致但是菌量完全可能差很多的，麻烦一点的办法就是全部用计数板数，然后根据密度计算需要接种的菌液体积

可是菌落计数太耗时间了，我无法保留那个原始菌液了，也不能放冰箱，放过冰箱我的菌活性会下降。。
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18楼2008-04-25 12:38:15
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qijilaji

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
引用回帖:
Originally posted by helenfang at 2008-4-24 20:46:
14楼的朋友说的很有道理，我也是这么感觉的，但是我很想知道我的培养基有颜色的是否会很影响结果，因为我用另一种培养基（只是和前一种C源不同，但灭菌后是无色的）同时培养，也测了OD，测得的OD值大小关系就有些 ...

你发的另外一个帖子我也回了，还有很多别的虫友都提到，培养基的颜色对测定的OD值肯定是有影响的，如果采用不同的培养基(假设初始都无色)，在培养过程中如果有显色的代谢物或者残渣生成，也会导致OD值的差异。所以一般都不用OD值来对不同菌株和不同培养基的菌数进行比较。
你如果是多次重复实验(不同的菌株和培养基)，那么建议你可以在第一次实验的时候用计数板数一下各个培养液中不同OD值下的菌数，以后就都可以通过OD值反算菌数了。说的比较绕，举例：
菌株A，培养基1，测定不同稀释倍数下的OD值并用计数板计数
菌株A，培养基2，测定不同稀释倍数下的OD值并用计数板计数
菌株A，培养基3，测定不同稀释倍数下的OD值并用计数板计数
菌株B，菌株C，同理
你如果只实验一次，这个笨办法就别用了，直接计数板数一次就好了
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19楼2008-04-26 10:09:58
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qijilaji

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by helenfang at 2008-4-18 19:53:
真的太感谢各位给我出主意了，我这有个办法不知道行不行，能不能请你们帮我看看，就是我挑取第一个菌的一定量菌体至EP管中，称菌体重量，加1ml水，其他的菌也挑取一定量并称重，但是加入的水按第一个菌的 菌体量/ ...

这种做法是保持质量浓度相同吧，不同的菌株肯定有差异的，个人觉得这种做法接种的菌数肯定不一样，说错了大家别骂哈
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20楼2008-04-26 10:14:25
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