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PAL,C4H和4CL酶活测定的方法和计算 已有1人参与
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求助:最近要做PAL,C4H和4CL这三个酶的活性测定,但不太清楚最终结果是如何计算的 PAL这个酶我已经做了,方法如下:取1ml反应液,加入2ml 硼酸缓冲液 ,最后加入酶液1ml,使反应总体积为4ml,对照不加酶液,用硼酸缓冲液代替(对照仅用于调零用)。将所有试管置于37℃恒温水浴中保温30min,后加0.2ml 6mol/L HCl终止反应,后于290nm 处测定吸光值。 文献当中讲:以每小时在290nm处吸光值变化0.01所需酶量为一个酶活单位。(相当每毫升反应混合物形成1ug肉桂酸)。计算方法: PAL活性:(0.01A/(gh))=△A*D/(0.01*W*t) △A:为反应时间内光密度的变化,W为样品鲜重(g),t 为反应时间,D为稀释倍数,即提取的总酶液为反应系统酶液体积的倍数 想问:△A是怎么来的呀?(每个管在OD290只测了一个数据呀) 另外C4H和4CL这两个酶的测定方法网上也很不一致,而且计算方法更不清楚,有哪位前辈有做过这个实验的,请帮帮忙呀! 请 求各位大师多多指教,不胜感激呀 |
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