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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 作物 » C4H和4CL酶活测定时各试剂是什么作用啊？谢谢回复啊
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行进使者

金虫 (初入文坛)

[交流] C4H和4CL酶活测定时各试剂是什么作用啊？谢谢回复啊

如题，做这方面实验不知道试剂均有什么作用，请各位指点一下啊，谢谢
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1楼 2013-09-03 10:17:14
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蓝苑1988

银虫 (小有名气)
★
行进使者(金币+1): 谢谢参与
e4H活性测定参照Lamb和Rube斗(1975)的方法"准确称取经液氮研磨后果实29,加入
4ml提取液(somMTris一HCI:pHS.9,15mM卜疏基乙醇,41llMMCg几,51刊MVe,10林MLeu卿nti,
lmMPMSF,0.15%:w/vPVP,10%甘油),混匀后超声波破碎Zmni,四层纱布过滤后,12000xg
4e离心20~,取上清液即为C4H粗酶提取液"酶反应液组成为:0.8ml酶提取液,.22Inl缓
冲液(2林M反式I勺桂酸,50mMTris一HCI:pH8.9,2卜MNADNPaZ,5林MG6一pNa"25Co卜振荡
反应30min后,加入100林16MHCI终止反应,12仪刃xg离心10min,取上清液在34omn处比
色"参比为不加酶提取液(加入.08mldd玮O)"OD值每lh变化.001为一个酶活性单位(U),
酶活性表示为:U/mg.prot.h"
4CL活性的测定按照Knobloeh和Hahlborek(1975)的方法"准确称取经液氮研磨后果实29,
加入4ml提取液(501llMTris一HCI:pH8.9,151llM卜疏基乙醇,5n1MED丁A,51llMVe.10卜M
Le叩Penti,1mMPMFs,0.巧%:w了vPPv,30%甘油),混匀后超声波破碎Znun,四层纱布过
滤后,120Ox0gCo4离心20mni,取上清液即为4CL粗酶提取液"反应液体积为3ml,其中含酶
液0.8ml,2.2ml(5mM对香豆酸,50浏MATp,11llMCo卉SH,151llMMgS04.7HZo),40e卜
反应10mni后,在333nnl处测定()D值,参比为不加酶提取液"OD值每lh变化.001为一个
酶活性单位(U),酶活性表示为:U/mg.porLho
我还没有开始测，不知道效果怎么样
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3楼2013-09-27 10:36:28
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蓝苑1988

银虫 (小有名气)
复制的效果不怎么样啊，你可以看看这篇文章，烤烟苯丙烷代谢中相关酶活性和多酚产物的关系研究，里边有这两种酶活测定方法，你测得什么材料啊？
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4楼2013-09-27 10:42:50
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盆小茹

新虫 (初入文坛)
★
行进使者(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
4楼: Originally posted by 蓝苑1988 at 2013-09-27 10:42:50
复制的效果不怎么样啊，你可以看看这篇文章，烤烟苯丙烷代谢中相关酶活性和多酚产物的关系研究，里边有这两种酶活测定方法，你测得什么材料啊？

请问你测出来了么 4CL 我有两个问题：1 是对香豆酸很不稳定，吸光值一直跳动。2 我想问一下测得吸光值是在10min 反应前后分别测定一个，相减麽？那这个值我测下来是负值，也就是吸光值在水浴后减少了，怎么办？
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5楼2014-07-18 20:26:18
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yingying15882楼
2013-09-03 15:45   回复  
行进使者(金币+1): 谢谢参与
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