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行进使者

金虫 (初入文坛)

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[交流] C4H和4CL酶活测定时各试剂是什么作用啊？谢谢回复啊

如题，做这方面实验不知道试剂均有什么作用，请各位指点一下啊，谢谢

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1楼 2013-09-03 10:17:14

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蓝苑1988

银虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2684732

★
行进使者(金币+1): 谢谢参与

e4H活性测定参照Lamb和Rube斗(1975)的方法"准确称取经液氮研磨后果实29,加入
4ml提取液(somMTris一HCI:pHS.9,15mM卜疏基乙醇,41llMMCg几,51刊MVe,10林MLeu卿nti,
lmMPMSF,0.15%:w/vPVP,10%甘油),混匀后超声波破碎Zmni,四层纱布过滤后,12000xg
4e离心20~,取上清液即为C4H粗酶提取液"酶反应液组成为:0.8ml酶提取液,.22Inl缓
冲液(2林M反式I勺桂酸,50mMTris一HCI:pH8.9,2卜MNADNPaZ,5林MG6一pNa

"25Co卜振荡
反应30min后,加入100林16MHCI终止反应,12仪刃xg离心10min,取上清液在34omn处比
色"参比为不加酶提取液(加入.08mldd玮O)"OD值每lh变化.001为一个酶活性单位(U),
酶活性表示为:U/mg.prot.h"
4CL活性的测定按照Knobloeh和Hahlborek(1975)的方法"准确称取经液氮研磨后果实29,
加入4ml提取液(501llMTris一HCI:pH8.9,151llM卜疏基乙醇,5n1MED丁A,51llMVe.10卜M
Le叩Penti,1mMPMFs,0.巧%:w了vPPv,30%甘油),混匀后超声波破碎Znun,四层纱布过
滤后,120Ox0gCo4离心20mni,取上清液即为4CL粗酶提取液"反应液体积为3ml,其中含酶
液0.8ml,2.2ml(5mM对香豆酸,50浏MATp,11llMCo卉SH,151llMMgS04.7HZo),40e卜
反应10mni后,在333nnl处测定()D值,参比为不加酶提取液"OD值每lh变化.001为一个
酶活性单位(U),酶活性表示为:U/mg.porLho
我还没有开始测，不知道效果怎么样