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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 果蔬 » 求果蔬中C4H，4CL 酶的测定方法或相关文献
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cherish-木

金虫 (小有名气)

[求助] 求果蔬中C4H，4CL 酶的测定方法或相关文献 已有1人参与

想要测定杏子中的C4H（肉桂酸羟化酶）、4CL（4-香豆酰-辅酶A 连接酶）,CHS（查尔酮合成酶），苦于没有准确测定方法，望各位前辈有做过相关实验的能不吝赐教，或者能给予相关外文文献全文（中文文献中的方法看过了但是不具体），谢谢各位了。
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最爱是特别
1楼 2013-12-03 22:37:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

蓝苑1988

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cherish-木 at 2013-12-18 16:44:42
非常感谢你的回复
还想请教一下，那个C4H的提取液里的成分，如Tris-HCL，巯基乙醇，甘油这些的量是多少？4CL的提取液也是。我现在方法也找到了，但是就是提取液里加的那些东西的量不知道怎么定，怎么加...

50mM Tris-Hcl的配方网上都有，你可以搜一下，其他的巯基乙醇 105uL（这个就是买的原液），Vc 0.044025g, 6水氯化镁 0.0813g, 亮肽素（我直接在管里加1 ml Tris-hcl, 短期用完的话放4度，长期的话可以分装一下放-20）237.8uL，PVP 0.15g, 甘油10ml, 最后用Tris-hcl定容到100ml，因为亮肽素在4度环境能放一周吧，所以配好之后尽快测。4cl的也差不多
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cherish-木 Nicholas_Ho
石头
9楼2013-12-24 11:28:37
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蓝苑1988

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cherish-木: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-18 16:45:11
我只测C4H 4CL，参照-美洲南瓜(Cucurbitapepo)种皮发育形态观察
及其相关酶活性测定，葡萄酒中酚酸及葡萄果实苯丙烷类代谢途径研究，听过这方面论文的，我测得菊花花瓣
C4H  参照Lamb 和Rubery等的方法。液氮研磨材料0.1g，加入10ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl：pH8.9，15mmol/L β-巯基乙醇，4 mmol/L MgCl2，5mmol/L Vc，10μmol/L Leupeptin 亮肽素，1 mmol/L PMSF，0.15%: w/v PVP，10%甘油，混匀后超声波破碎2 min，四层纱布过滤后，在4℃下以12000r./min 离心20min .取上清液为C4H粗酶提取液。酶反应液组成为：0.8ml 酶提取液，2.2ml缓冲液（2μmol/L 反式肉桂酸，50 mmol/L Tris-HCl: pH8.9，2μmol/L NADPNa2，5μmol/L G-6-PNa2）。25℃下振荡30分钟后，100r/min，加入100μL 6mol/L HCl终止反应，以12000r./min 离心10min，取上清液在340 nm处比色。参比为不加酶提取液（加入0.8 mL ddH2O）。OD值每1h变化0.01为一个酶活性单位，酶活性表示为：U/mg.prot.h
4CL  按照Knobloch和Halllbrock(1975)的方法。液氮研磨材料0.1g，加入10ml提取液(50mMTris-HCI: pH8.9，15mM β-疏基乙醇，5mM EDTA，
5mM Vc，10mM Leupeptin，lmM PMSF，0.15%: m/V PVP，10%甘油)，混匀后超声波破碎2min，四层纱布过滤后，在4℃下以12000r./min 离心20min，取上清液即为4CL粗酶提取液。反应液体积为3mL，其中含酶液0.4mL，3ml(5µM对香豆酸，50µM ATP，1µM CoA-SH，15µM MgSO4•7H2O)， 40℃下反应10min后，在333nm处测定OD值，参比为不加酶提取液。OD值每1h变化0.0001为一个酶活性单位，酶活性表示为:U/mg.prot.h。
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石头
6楼2013-12-18 10:27:22
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普通回帖

zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cherish-木: 金币+2 2013-12-04 10:13:55
内容已删除
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走的太远，别忘了为何出发
2楼2013-12-04 10:07:46
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cherish-木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zybpxy at 2013-12-04 10:07:46
http://www.webofknowledge.com/
建议到上面网址进行查找

学校的IP无法使用这个资源
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最爱是特别
3楼2013-12-04 10:13:26
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

http://apps.webofknowledge.com/U ... p;preferencesSaved=

点击以上网址注册
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走的太远，别忘了为何出发
4楼2013-12-04 11:11:19
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蓝苑1988

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zybpxy at 2013-12-04 11:11:19
http://apps.webofknowledge.com/UA_GeneralSearch_input.do?product=UA&search_mode=GeneralSearch&SID=2FS7zTGms8xX9TH4cTY&preferencesSaved=

点击以上网址注册

有没有具体的酶活计算公式啊，已经测过了，就是不知道怎么算啊
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石头
5楼2013-12-18 10:18:26
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cherish-木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 蓝苑1988 at 2013-12-18 10:18:26
有没有具体的酶活计算公式啊，已经测过了，就是不知道怎么算啊...

具体的计算公式我也没找到，但是感觉这个应该和其他酶的算法是一样的吧：（ODs-ODc）*V / 0.01*Vs*t*w

ODs------样品管反应溶液的吸光度值
ODc-----对照管反应溶液的吸光度值
V-----样品提取液总体积，mL
Vs-----测定时所取样品提取液体积，mL
t-----酶促反应时间，h
w-----样品重量，g
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最爱是特别
7楼2013-12-18 16:40:30
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cherish-木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蓝苑1988 at 2013-12-18 10:27:22
我只测C4H 4CL，参照-美洲南瓜(Cucurbitapepo)种皮发育形态观察
及其相关酶活性测定，葡萄酒中酚酸及葡萄果实苯丙烷类代谢途径研究，听过这方面论文的，我测得菊花花瓣
C4H  参照Lamb 和Rubery等的方法。液氮研磨 ...

非常感谢你的回复
还想请教一下，那个C4H的提取液里的成分，如Tris-HCL，巯基乙醇，甘油这些的量是多少？4CL的提取液也是。我现在方法也找到了，但是就是提取液里加的那些东西的量不知道怎么定，怎么加
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最爱是特别
8楼2013-12-18 16:44:42
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cherish-木

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 蓝苑1988 at 2013-12-24 11:28:37
50mM Tris-Hcl的配方网上都有，你可以搜一下，其他的巯基乙醇 105uL（这个就是买的原液），Vc 0.044025g, 6水氯化镁 0.0813g, 亮肽素（我直接在管里加1 ml Tris-hcl, 短期用完的话放4度，长期的话可以分装一下放-2 ...

太感谢你了，问了好多都没有得到解答，真的很感谢
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最爱是特别
10楼2013-12-26 11:37:31
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