| 查看: 3728 | 回复: 27 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
cherish-木金虫 (小有名气)
|
[求助]
求果蔬中C4H，4CL 酶的测定方法或相关文献 已有1人参与
|
||
想要测定杏子中的C4H（肉桂酸羟化酶）、4CL（4-香豆酰-辅酶A 连接酶）,CHS（查尔酮合成酶），苦于没有准确测定方法 ，望各位前辈有做过相关实验的能不吝赐教，或者能给予相关外文文献全文（中文文献中的方法看过了但是不具体），谢谢各位了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
电子科技大学（深圳）高等研究院陈明豪课题组招收推免硕士研究生
已经有816人回复
-
金铜纳米合成
已经有0人回复
-
食品科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有219人回复
-
求助1977版中国药典，非常感谢！！！
已经有1人回复
-
萝卜干防腐 馊酸味 微生物
已经有1人回复
-
求助bncc来源的金黄色葡萄球菌批号
已经有1人回复
-
国自然和省自然祈祷
已经有52人回复
-
祈福今年面上得中
已经有14人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有14人回复
-
基金评审意见有问题
已经有5人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
cherish-木: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-18 16:45:11
cherish-木: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-18 16:45:11
|
我只测C4H 4CL，参照-美洲南瓜(Cucurbitapepo)种皮发育形态观察 及其相关酶活性测定，葡萄酒中酚酸及葡萄果实苯丙烷类代谢途径研究，听过这方面论文的，我测得菊花花瓣 C4H 参照Lamb 和Rubery等的方法。液氮研磨材料0.1g，加入10ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl：pH8.9，15mmol/L β-巯基乙醇，4 mmol/L MgCl2，5mmol/L Vc，10μmol/L Leupeptin 亮肽素，1 mmol/L PMSF，0.15%: w/v PVP，10%甘油，混匀后超声波破碎2 min，四层纱布过滤后，在4℃下以12000r./min 离心20min .取上清液为C4H粗酶提取液。酶反应液组成为：0.8ml 酶提取液，2.2ml缓冲液（2μmol/L 反式肉桂酸，50 mmol/L Tris-HCl: pH8.9，2μmol/L NADPNa2，5μmol/L G-6-PNa2）。25℃下振荡30分钟后，100r/min，加入100μL 6mol/L HCl终止反应，以12000r./min 离心10min，取上清液在340 nm处比色。参比为不加酶提取液（加入0.8 mL ddH2O）。OD值每1h变化0.01为一个酶活性单位，酶活性表示为：U/mg.prot.h 4CL 按照Knobloch和Halllbrock(1975)的方法。液氮研磨材料0.1g，加入10ml提取液(50mMTris-HCI: pH8.9，15mM β-疏基乙醇，5mM EDTA， 5mM Vc，10mM Leupeptin，lmM PMSF，0.15%: m/V PVP，10%甘油)，混匀后超声波破碎2min，四层纱布过滤后，在4℃下以12000r./min 离心20min，取上清液即为4CL粗酶提取液。反应液体积为3mL，其中含酶液0.4mL，3ml(5µM对香豆酸，50µM ATP，1µM CoA-SH，15µM MgSO4•7H2O)， 40℃下反应10min后，在333nm处测定OD值，参比为不加酶提取液。OD值每1h变化0.0001为一个酶活性单位，酶活性表示为:U/mg.prot.h。 |
6楼2013-12-18 10:27:22
cherish-木
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 588.8
- 散金: 15
- 帖子: 89
- 在线: 68.6小时
- 虫号: 2561085
- 注册: 2013-07-23
- 专业: 食品科学基础
3楼2013-12-04 10:13:26
zybpxy
铁杆木虫 (著名写手)
致斋大人
- 食品EPI: 12
- 应助: 506 (博士)
- 贵宾: 0.085
- 金币: 5395.7
- 散金: 2020
- 红花: 54
- 沙发: 1
- 帖子: 2415
- 在线: 341.3小时
- 虫号: 2019461
- 注册: 2012-09-21
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
4楼2013-12-04 11:11:19
5楼2013-12-18 10:18:26
20