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hj890509金虫 (正式写手)
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[求助]
连接转化问题 已有6人参与
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| 表达载体连接片段转化后不长菌落，转质粒验证过感受态细胞没有问题，配置的平板也没有问题，表达载体用AvrII和SnaBI双酶切，一个是粘性末端，另一个是平末端，目的片段是用相同的酶从T载体上切下来回收的，载体9.3kb，目的片段4.4kb，摩尔比为1:3,1:5,1:8都做过，用NEB的T4连接酶22度连接2h后转化的，也做过其他时间，求各位虫友们帮忙分析分析，谢啦 |
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12楼2014-10-09 10:11:55
2楼2014-09-02 14:50:24
111111111118
银虫 (正式写手)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hj890509: 金币+5, ★有帮助 2014-09-11 14:58:38
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hj890509: 金币+5, ★有帮助 2014-09-11 14:58:38
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对于涉及到平末端的克隆， 建议你看看另一个帖子和相关论文： http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7727916 应该还是很有帮助的， 毕竟平末端克隆的难度大一些， 得需要点特殊处理， 希望能有帮助！ |
3楼2014-09-02 16:18:50
huyan0817
木虫 (正式写手)
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4楼2014-09-02 17:22:34