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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 新手养Hela细胞，总是有成团的现象，感觉是重悬出了问题，求助技巧！！！
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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手养Hela细胞，总是有成团的现象，感觉是重悬出了问题，求助技巧！！！已有3人参与

如题…

细胞贴壁生长后，镜下总能看到几个细胞聚成一团生长，密度达到80-90%时位于团块中心的细胞状态就很不好了。个人感觉是细胞重悬出了问题，但每次吹打、混合时都操作了20次左右，肉眼也看不到团块，不知道该怎么改进操作啊>_<…………

养了快两个月了一直是这种状态，细胞分不匀影响后续实验，急啊……求大虾们给些技术上的建议，多谢了！！！！！！
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1楼2014-09-01 00:16:18
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风信子寻梦

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细胞成团有两个最基本原因：1、不管消化不够还是消化过头，消化不够细胞本身就是成团的，消化过头单个细胞会抱团，所以吹打很关键，一定要吹打细胞成单个状态；2、传代接种一定要铺的均匀，不然细胞还是会抱团生长；最后接种完毕一定要显微镜下观察！
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8楼2014-09-01 10:40:42
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是消化时间没有掌握好，把细胞消化至缩回来变圆，但有没有从壁上脱落下来，这种状态就一吹全部都是散的细胞。
不同状态的细胞消化时间不太一样，可以适当稀释胰酶，直接在室温消化，一直观察，也可以在37度放2min就拿出来，自己摸索好时间。
消化过了细胞成团脱落，如果一直掌握不好的话，就不如牺牲一些细胞，只保留部分比较散的细胞，hela只要养起来就基本是疯长的。
前面也有虫子提到过，吹了之后要到显微镜下看看才行啊
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你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2014-09-01 09:21:52
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从前养一次上皮细胞也出现成团，甚至不贴壁，别人给看了说是消化过头了
还有一次养别的细胞，消化不太够，细胞不好吹散，有很多成团的。
不知道你是不是消化控制得不好

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2楼2014-09-01 07:42:32
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

看你的说法，吹完后没在显微镜下看看呢？

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3楼2014-09-01 07:47:03
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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2014-09-01 09:21:52
应该是消化时间没有掌握好，把细胞消化至缩回来变圆，但有没有从壁上脱落下来，这种状态就一吹全部都是散的细胞。
不同状态的细胞消化时间不太一样，可以适当稀释胰酶，直接在室温消化，一直观察，也可以在37度放2 ...

谢谢～！不过要怎么分离成团的细胞和分散的细胞？

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5楼2014-09-01 09:24:57
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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-01 07:42:32
从前养一次上皮细胞也出现成团，甚至不贴壁，别人给看了说是消化过头了
还有一次养别的细胞，消化不太够，细胞不好吹散，有很多成团的。
不知道你是不是消化控制得不好

谢谢~之后调整下消化时间看看^ ^

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6楼2014-09-01 09:26:01
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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-01 07:47:03
看你的说法，吹完后没在显微镜下看看呢？

吹完后确实没有镜检…这个时候应该看什么？如果发现有成团细胞该咋做？谢谢~^ ^

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7楼2014-09-01 09:28:16
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by LisaT_PUMC at 2014-09-01 09:28:16
吹完后确实没有镜检…这个时候应该看什么？如果发现有成团细胞该咋做？谢谢~^ ^
...

消化不充分成团，长起来还是成团长，再消化时成团的部分还是消化不够，还是成团。
要不你尝试轻微的消化，消化下来接新瓶，这些细胞应该是散的。

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9楼2014-09-01 12:37:38
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

每个人消化技巧不一样，我在瓶子里消化从来没有拿出来在镜下看过，是在细胞上滴一滴胰酶看看消化程度。一点点的往下掉就行了，哗啦啦的大片的掉，就消化过头了

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10楼2014-09-01 12:41:39
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