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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手养Hela细胞,总是有成团的现象,感觉是重悬出了问题,求助技巧!!! 已有3人参与

如题…

细胞贴壁生长后,镜下总能看到几个细胞聚成一团生长,密度达到80-90%时位于团块中心的细胞状态就很不好了。个人感觉是细胞重悬出了问题,但每次吹打、混合时都操作了20次左右,肉眼也看不到团块,不知道该怎么改进操作啊>_<…………

养了快两个月了一直是这种状态,细胞分不匀影响后续实验,急啊……求大虾们给些技术上的建议,多谢了!!!!!!
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是消化时间没有掌握好,把细胞消化至缩回来变圆,但有没有从壁上脱落下来,这种状态就一吹全部都是散的细胞。
不同状态的细胞消化时间不太一样,可以适当稀释胰酶,直接在室温消化,一直观察,也可以在37度放2min就拿出来,自己摸索好时间。
消化过了细胞成团脱落,如果一直掌握不好的话,就不如牺牲一些细胞,只保留部分比较散的细胞,hela只要养起来就基本是疯长的。
前面也有虫子提到过,吹了之后要到显微镜下看看才行啊
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2014-09-01 09:21:52
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从前养一次上皮细胞也出现成团,甚至不贴壁,别人给看了说是消化过头了
还有一次养别的细胞,消化不太够,细胞不好吹散,有很多成团的。
不知道你是不是消化控制得不好

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-09-01 07:42:32
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

看你的说法,吹完后没在显微镜下看看呢?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-09-01 07:47:03
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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2014-09-01 09:21:52
应该是消化时间没有掌握好,把细胞消化至缩回来变圆,但有没有从壁上脱落下来,这种状态就一吹全部都是散的细胞。
不同状态的细胞消化时间不太一样,可以适当稀释胰酶,直接在室温消化,一直观察,也可以在37度放2 ...

谢谢~!不过要怎么分离成团的细胞和分散的细胞?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2014-09-01 09:24:57
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