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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 新手养Hela细胞，总是有成团的现象，感觉是重悬出了问题，求助技巧！！！
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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手养Hela细胞，总是有成团的现象，感觉是重悬出了问题，求助技巧！！！ 已有3人参与

如题…

细胞贴壁生长后，镜下总能看到几个细胞聚成一团生长，密度达到80-90%时位于团块中心的细胞状态就很不好了。个人感觉是细胞重悬出了问题，但每次吹打、混合时都操作了20次左右，肉眼也看不到团块，不知道该怎么改进操作啊>_<…………

养了快两个月了一直是这种状态，细胞分不匀影响后续实验，急啊……求大虾们给些技术上的建议，多谢了！！！！！！
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1楼 2014-09-01 00:16:18
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是消化时间没有掌握好，把细胞消化至缩回来变圆，但有没有从壁上脱落下来，这种状态就一吹全部都是散的细胞。
不同状态的细胞消化时间不太一样，可以适当稀释胰酶，直接在室温消化，一直观察，也可以在37度放2min就拿出来，自己摸索好时间。
消化过了细胞成团脱落，如果一直掌握不好的话，就不如牺牲一些细胞，只保留部分比较散的细胞，hela只要养起来就基本是疯长的。
前面也有虫子提到过，吹了之后要到显微镜下看看才行啊
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你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2014-09-01 09:21:52
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从前养一次上皮细胞也出现成团，甚至不贴壁，别人给看了说是消化过头了
还有一次养别的细胞，消化不太够，细胞不好吹散，有很多成团的。
不知道你是不是消化控制得不好

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-09-01 07:42:32
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

看你的说法，吹完后没在显微镜下看看呢？

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-09-01 07:47:03
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LisaT_PUMC

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2014-09-01 09:21:52
应该是消化时间没有掌握好，把细胞消化至缩回来变圆，但有没有从壁上脱落下来，这种状态就一吹全部都是散的细胞。
不同状态的细胞消化时间不太一样，可以适当稀释胰酶，直接在室温消化，一直观察，也可以在37度放2 ...

谢谢～！不过要怎么分离成团的细胞和分散的细胞？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-09-01 09:24:57
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