24小时热门版块排行榜    

查看: 1560  |  回复: 12

Dearstar

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by kehan777 at 2014-09-01 18:42:11
可以的话,把你的序列复制到这上面来,基因序列和载体的用大小写区分开,或者你自己再画一画图谱再确认一下。
你的框架应该是:信号肽(已含ATG)+个别氨基酸+EcoRI+目的基因+终止密码子+NotI...

恩,你说的完全正确,框架就是这个样子的,其实我想了想前面的AA如果不影响分泌的话,反正最终我还要用酶把目标序列前面几个AA剪切掉的,所以想来想去,决定两个一起做,一边是就这么表达,另外一边是基因敲除掉这些个多余的DNA,你觉得呢?但是这么9.5kb长的DNA,还不知道PCR用什么条件才好啊!
11楼2014-09-02 08:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kehan777

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by Dearstar at 2014-09-02 08:41:36
恩,你说的完全正确,框架就是这个样子的,其实我想了想前面的AA如果不影响分泌的话,反正最终我还要用酶把目标序列前面几个AA剪切掉的,所以想来想去,决定两个一起做,一边是就这么表达,另外一边是基因敲除掉这 ...

1. 先确认真的是有几个AA,我的只多1个AA,你可以把你序列上的“肽信号肽+个别氨基酸+EcoRI”这一段复制上来核对一下。如果只有1个AA,即三个碱基的话,可以考虑设计引物去除
2. 请问你用什么酶切掉AA?还是说你的目的基因上已加入了蛋白酶切位点?
12楼2014-09-02 10:36:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dearstar

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by kehan777 at 2014-09-02 10:36:38
1. 先确认真的是有几个AA,我的只多1个AA,你可以把你序列上的“肽信号肽+个别氨基酸+EcoRI”这一段复制上来核对一下。如果只有1个AA,即三个碱基的话,可以考虑设计引物去除
2. 请问你用什么酶切掉AA?还是说你的 ...

加上Ecor I 酶切位点表达的2个,一共是四个,我正是打算设计一个长引物将其做缺失突变。没有加蛋白酶切位点。
13楼2014-09-02 13:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Dearstar 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见