应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教pPIC9载体上xhoI位点明明说是特异性的，为什么分析切得到了二个位置有。。
51/1返回列表
查看: 1692  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Dearstar

新虫 (小有名气)

[交流] 请教pPIC9载体上xhoI位点明明说是特异性的，为什么分析切得到了二个位置有。。 已有1人参与

pPIC9载体说明上说，载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为Xho I, SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.

为什么分析了pPIC9的序列却发现二个位置有xho I这个酶切位点， 一个是1192.一个是5709。真心不知道如果以后用xhoI 酶切的时候会怎么样。有没有做过的指导一下。

另外如果我要是选择将我的目的片断插入到pPIC9K中，选择用Ecor I 和 Not I 的话，信号肽酶切位点之后， 到Ecor I的几个氨基酸是怎么去掉的。
小妹初入酵母，还不是特别明白，跪求高手指教啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-29 09:34:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kehan777

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:22:31
引用回帖:
6楼: Originally posted by Dearstar at 2014-09-01 09:04:57
你好，非常感谢你的回复。
前面是不是多了二三个AA呢，我看好像不止一个呢，还有后面，到TAA还有几个氨基酸，这是怎么去掉的呢，你提醒了我后面也有啊。我是不是应该在我的序列后面加一个终止子呢，因为我的序列是 ...

可以的话，把你的序列复制到这上面来，基因序列和载体的用大小写区分开，或者你自己再画一画图谱再确认一下。
你的框架应该是：信号肽（已含ATG)+个别氨基酸+EcoRI+目的基因+终止密码子+NotI
赞一下 回复此楼
10楼2014-09-01 18:42:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Dearstar(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:50:08
那就是多了几个氨基酸，避免不了的，有可能有多余的抗原性

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-29 09:38:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Dearstar(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:50:18
如果选用Ecor I 和 Not I 的话，就会切掉Avr II酶切位点，其他没什么。
载体介绍说是单一酶切位点，如果你构建酵母表达质粒，选用双酶切位点，避开这个酶切位点就可以啦。
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-29 11:27:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caihang

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-08-29 23:51:12
xhoI和sacI酶切位点非常像，不建议用xhoI，因为它是平滑末端，连接效率比粘性末端低很多。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-29 22:11:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 292求调剂 +9 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 10/500 2026-03-26 16:27 by 不吃魚的貓
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +5 kongweilin 2026-03-26 7/350 2026-03-26 14:37 by mapenggao
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭