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Dearstar

新虫 (小有名气)

[交流] 请教pPIC9载体上xhoI位点明明说是特异性的,为什么分析切得到了二个位置有。。 已有1人参与

pPIC9载体说明上说,载体构建过程中,可供使用的单一限制性内切酶位点为Xho I, SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.

为什么分析了pPIC9的序列却发现二个位置有xho I这个酶切位点, 一个是1192.一个是5709。真心不知道如果以后用xhoI 酶切的时候会怎么样。有没有做过的指导一下。

另外如果我要是选择将我的目的片断插入到pPIC9K中,选择用Ecor I 和 Not I 的话,信号肽酶切位点之后, 到Ecor I的几个氨基酸是怎么去掉的。
小妹初入酵母,还不是特别明白,跪求高手指教啊
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Dearstar

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by kehan777 at 2014-09-02 10:36:38
1. 先确认真的是有几个AA,我的只多1个AA,你可以把你序列上的“肽信号肽+个别氨基酸+EcoRI”这一段复制上来核对一下。如果只有1个AA,即三个碱基的话,可以考虑设计引物去除
2. 请问你用什么酶切掉AA?还是说你的 ...

加上Ecor I 酶切位点表达的2个,一共是四个,我正是打算设计一个长引物将其做缺失突变。没有加蛋白酶切位点。
13楼2014-09-02 13:56:02
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bio_sci

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Dearstar(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:50:08
那就是多了几个氨基酸,避免不了的,有可能有多余的抗原性

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-29 09:38:48
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happydove

新虫 (小有名气)

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Dearstar(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:50:18
如果选用Ecor I 和 Not I 的话,就会切掉Avr II酶切位点,其他没什么。
载体介绍说是单一酶切位点,如果你构建酵母表达质粒,选用双酶切位点,避开这个酶切位点就可以啦。
3楼2014-08-29 11:27:41
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caihang

铜虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-08-29 23:51:12
xhoI和sacI酶切位点非常像,不建议用xhoI,因为它是平滑末端,连接效率比粘性末端低很多。
4楼2014-08-29 22:11:09
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