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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

[求助] 十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙 已有8人参与

虫子我做DNA电泳接近4年了，从来没失过手，大家可能会想这是一个很简单的实验，怎么会有问题呢？我也是这么想的。所以我师妹出了问题后，我以为很简单就能解决，谁料我亲自上阵，搞了好久问题依旧。真是一世英名毁于这个入门实验手上，晚节不保啊！这不想起了小木虫，特来求助。

言归正传：问题：见图片，不管怎么跑，MARKER都是这个鬼样子，一开始还只有低于500BP的marker出现这样的情况，后面越来越严重，所有的都这样了。

那么问题很简单，我当然不会简单的就来求助，我尝试过哪些解决办法呢？

    一，换电泳Buffer。对师妹不放心，亲自配置新鲜的Buffer，问题依旧。
    二，新买Marker。 这换了Buffer没用，难道Mraker太久了，出问题了？买了俩支新Mraker，一支takara的，一支fermentas的。问题依旧。
    三，新买琼脂糖。 没办法，怀疑琼脂糖有问题，新买了一瓶BIOWEST的琼脂糖。问题依旧。
    四，新买染料。 我们实验室用的是Biotum的gelred，买了大概有大半年了，怀疑染料出了问题，买一支新的。问题依旧。
    五，换电泳仪。 难道电泳仪老化，电压不稳？换另一个一直在跑蛋白偶尔也跑跑中性PAGE的电泳仪（一直正常运行）。问题依旧。
   
神啊，都换得差不多了，还是老样子，这可如何是好？  难道是我加热的姿势不对？微波炉加热和电磁炉加热会有区别吗？明天试试。

十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙
20140825.jpg
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1楼 2014-08-26 20:10:27
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独身行天下

金虫 (小有名气)
会不会是琼脂糖浓度问题？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-08-26 20:26:35
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莫伊2013

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿修罗Axuro(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-28 17:41:28
是不是水被污染了，配BUFFER的水被污染，或者装BUFFER的瓶子被污染了
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3楼2014-08-26 20:28:35
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-26 20:28:35
是不是水被污染了，配BUFFER的水被污染，或者装BUFFER的瓶子被污染了

我新配Buffer的时候，全是新换的。而且后面又继续新配了几批Buffer，也是一样的问题。
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4楼2014-08-26 20:38:39
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-26 20:28:35
是不是水被污染了，配BUFFER的水被污染，或者装BUFFER的瓶子被污染了

还有一个现象就是：片段小一些的PCR产物可以跑得很清晰，但是就是Marker有问题，很诡异。
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5楼2014-08-26 20:41:12
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 独身行天下 at 2014-08-26 20:26:35
会不会是琼脂糖浓度问题？

琼脂糖浓度不影响电泳的呀。不同的浓度只是分离的DNA的范围不同，我用的是1%的琼脂糖。2%也好 3%也好，只是分离DNA范围不一样，不影响电泳的。我印象中貌似试过一次3%的胶，结果也是一样的。
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6楼2014-08-26 20:48:43
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独身行天下

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-26 20:38:39
我新配Buffer的时候，全是新换的。而且后面又继续新配了几批Buffer，也是一样的问题。...

loading buffer？

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-08-26 20:49:21
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 独身行天下 at 2014-08-26 20:49:21
loading buffer？
...

Marker不用加Loading Buffer的，是买来就加了Loading Buffer的。
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8楼2014-08-26 20:55:05
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lingsheshidu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿修罗Axuro: 金币+5, ★有帮助, 感谢帮助，问题已经解决，另发一贴在分子生物板块。谢谢 2014-08-28 16:16:44
楼主把可能的问题想的已经比较全面了，可问题依旧。最后问到了做胶时的加热方法，这个虽说不是很关键，但是请问楼主你出问题之前用的什么加热？期间换了吗？因为如果加热琼脂糖时瓶子敞口，会导致水分蒸发，加热时间越长蒸发越严重，导致凝胶内缓冲液浓度升高，如果高出电泳缓冲液浓度太多，会影响电泳效果，建议考虑下这个因素。
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积累知识，抓紧奋斗！
9楼2014-08-26 21:25:26
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独身行天下

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-26 20:55:05
Marker不用加Loading Buffer的，是买来就加了Loading Buffer的。...

前面四个样品跑的还行，后面四个样品和maker都出现了拖尾。可能是溶胶不均匀；梳子不干净，上样孔出现问题；

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10楼2014-08-26 21:26:45
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