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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

[求助] 十分诡异的电泳问题,困扰太久了,求各位帮忙 已有8人参与

虫子我做DNA电泳接近4年了,从来没失过手,大家可能会想这是一个很简单的实验,怎么会有问题呢?我也是这么想的。所以我师妹出了问题后,我以为很简单就能解决,谁料我亲自上阵,搞了好久问题依旧。真是一世英名毁于这个入门实验手上,晚节不保啊!这不想起了小木虫,特来求助。

言归正传:问题:见图片,不管怎么跑,MARKER都是这个鬼样子,一开始还只有低于500BP的marker出现这样的情况,后面越来越严重,所有的都这样了。

那么问题很简单,我当然不会简单的就来求助,我尝试过哪些解决办法呢?

    一,换电泳Buffer。对师妹不放心,亲自配置新鲜的Buffer,问题依旧。
    二,新买Marker。 这换了Buffer没用,难道Mraker太久了,出问题了?买了俩支新Mraker,一支takara的,一支fermentas的。问题依旧。
    三,新买琼脂糖。 没办法,怀疑琼脂糖有问题,新买了一瓶BIOWEST的琼脂糖。问题依旧。
    四,新买染料。 我们实验室用的是Biotum的gelred,买了大概有大半年了,怀疑染料出了问题,买一支新的。问题依旧。
    五,换电泳仪。 难道电泳仪老化,电压不稳?换另一个一直在跑蛋白偶尔也跑跑中性PAGE的电泳仪(一直正常运行)。问题依旧。
   
神啊,都换得差不多了,还是老样子,这可如何是好?  难道是我加热的姿势不对?微波炉加热和电磁炉加热会有区别吗?明天试试。

十分诡异的电泳问题,困扰太久了,求各位帮忙
20140825.jpg
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独身行天下

金虫 (小有名气)

会不会是琼脂糖浓度问题?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-26 20:26:35
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莫伊2013

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
阿修罗Axuro(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-28 17:41:28
是不是水被污染了,配BUFFER的水被污染,或者装BUFFER的瓶子被污染了
3楼2014-08-26 20:28:35
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-26 20:28:35
是不是水被污染了,配BUFFER的水被污染,或者装BUFFER的瓶子被污染了

我新配Buffer的时候,全是新换的。而且后面又继续新配了几批Buffer,也是一样的问题。
4楼2014-08-26 20:38:39
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-26 20:28:35
是不是水被污染了,配BUFFER的水被污染,或者装BUFFER的瓶子被污染了

还有一个现象就是:片段小一些的PCR产物可以跑得很清晰,但是就是Marker有问题,很诡异。
5楼2014-08-26 20:41:12
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 独身行天下 at 2014-08-26 20:26:35
会不会是琼脂糖浓度问题?

琼脂糖浓度不影响电泳的呀。不同的浓度只是分离的DNA的范围不同,我用的是1%的琼脂糖。2%也好 3%也好,只是分离DNA范围不一样,不影响电泳的。我印象中貌似试过一次3%的胶,结果也是一样的。
6楼2014-08-26 20:48:43
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独身行天下

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-26 20:38:39
我新配Buffer的时候,全是新换的。而且后面又继续新配了几批Buffer,也是一样的问题。...

loading buffer?

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-08-26 20:49:21
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 独身行天下 at 2014-08-26 20:49:21
loading buffer?
...

Marker不用加Loading Buffer的,是买来就加了Loading Buffer的。
8楼2014-08-26 20:55:05
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lingsheshidu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
阿修罗Axuro: 金币+5, 有帮助, 感谢帮助,问题已经解决,另发一贴在分子生物板块。谢谢 2014-08-28 16:16:44
楼主把可能的问题想的已经比较全面了,可问题依旧。最后问到了做胶时的加热方法,这个虽说不是很关键,但是请问楼主你出问题之前用的什么加热?期间换了吗?因为如果加热琼脂糖时瓶子敞口,会导致水分蒸发,加热时间越长蒸发越严重,导致凝胶内缓冲液浓度升高,如果高出电泳缓冲液浓度太多,会影响电泳效果,建议考虑下这个因素。
积累知识,抓紧奋斗!
9楼2014-08-26 21:25:26
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独身行天下

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-26 20:55:05
Marker不用加Loading Buffer的,是买来就加了Loading Buffer的。...

前面四个样品跑的还行,后面四个样品和maker都出现了拖尾。可能是溶胶不均匀;梳子不干净,上样孔出现问题;

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-08-26 21:26:45
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