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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » southern blot 点杂交一直不出现显色点
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LTengEr

新虫 (初入文坛)

[求助] southern blot 点杂交一直不出现显色点 已有1人参与

探针浓度为25 ng/ml。膜是尼龙膜。
预杂交液：5X SSC,0.02%SDS,1%Blocking Reagent预杂交温度65°，4小时
在杂交袋里65°恒温水浴锅里杂交过夜
试剂盒是BOSTER DIG Random Labeling and Detection Kit I(POD)
(for color detection with DAB)
在显色的时候尼龙膜上背景有土黄的颜色，然后烘烤干燥后颜色会明显变淡。
做了很多次一直没有结果。后来又重新测了各瓶溶液的pH，发现pH都不对了，重新调了pH再做还是不行。
求大神帮助。
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1楼 2014-08-22 12:02:11
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vltaober

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

http://www.ebioq.com/openlab/43/0 这个里面有关于southern blot的技术资料问答，可以去逛逛，如果实在有问题还可以咨询他们的，我们也在这做过，嗯，棒棒的。
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3楼2016-07-04 16:30:56
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LTengEr

新虫 (初入文坛)
应该是检测探针灵敏度的结果，2号的是结果吗？还是只是背景？
我的背景为什么这么深是哪里有问题吗？哪里应该改进？
求大神分析一下
southern blot 点杂交一直不出现显色点
1.jpg


southern blot 点杂交一直不出现显色点-1
1_副本.jpg


southern blot 点杂交一直不出现显色点-2
2.jpg
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2楼2014-08-24 21:19:58
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jackyoung

新虫 (正式写手)
应该是显色剂有问题了吧，拿试剂盒里带的control做个点杂看一看，至少要保证抗体到显色剂都没有问题再说。

发自小木虫Android客户端
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CestLaVie
4楼2016-07-05 08:34:11
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2016-08-10 21:07:45
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