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seahzau金虫 (小有名气)
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[交流]
提取的草莓叶片DNA呈粘稠状，为什么？影响PCR结果吗？谢谢！
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最近小量法提取了转基因草莓叶片DNA进行PCR鉴定，发现DNA溶解后呈粘稠状，用枪都不易吸取来，请问是什么原因啊？因为含糖量过高吗？怎么解决啊？ 但电泳检测，DNA带很明显，这种质量的DNA影响PCR鉴定结果吗？我共鉴定了70个转基因的草莓样品，都没有得到阳性的转基因植株，是DNA的问题还是确实外源基因没有转进去呢？急需各位高手帮忙，非常感谢！！！！ [search]草莓[/search] |
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2楼2008-04-13 22:50:58
qiafeixn
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3楼2008-04-14 02:02:28
4楼2008-04-14 10:55:12
seahzau
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非常感谢各位老师的帮忙，没想到这么快就有回复！呵呵，我提取DNA的方法是： 1、取一小片试管苗叶片于1.5ml离心管，加入液氮后迅速研磨成粉末；然后立即加入预热到65度高盐提取缓冲液650ul（盐提取液配方如下0.05 mol/L Tris-HCl ( pH = 8.0 ) , 1.4 mol/L NaCI, 0.02 mol/L EDTA(pH = 8.0 ), 1.0% PVP, 2.0% CTA.B, 2.0%琉基乙醇。），充分摇匀，然后65℃水浴加热60-90分钟； 2、水浴加热结束后，加入700ul苯酚：氯仿：异戊醇=25：24：1，轻轻摇匀约 10min，12000r/min离心10min; 3、小心吸取上清液至另一离心管，加入700ul氯仿：异戊醇=24：1，轻摇混匀 约10min，12000r/min离心10min； 4、小心吸取上清液至另一离心管，加入冰冻的无水乙醇1ml，轻轻摇匀，-20℃冰箱中冷冻30min; 5、12000r/min离心15min后，倒掉上清液，加入70%酒精浸泡清洗约5h， 6、短暂离心后，倒掉上清液，风干，最后加入30ul蒸馏水溶解。 我一定用大家的方法再试试 ，再次感谢！ |
5楼2008-04-14 16:04:42
seahzau
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6楼2008-04-14 16:12:56
xxh8372
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7楼2008-04-14 17:15:40
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