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seahzau

金虫 (小有名气)

[交流] 提取的草莓叶片DNA呈粘稠状,为什么?影响PCR结果吗?谢谢!

最近小量法提取了转基因草莓叶片DNA进行PCR鉴定,发现DNA溶解后呈粘稠状,用枪都不易吸取来,请问是什么原因啊?因为含糖量过高吗?怎么解决啊?
但电泳检测,DNA带很明显,这种质量的DNA影响PCR鉴定结果吗?我共鉴定了70个转基因的草莓样品,都没有得到阳性的转基因植株,是DNA的问题还是确实外源基因没有转进去呢?急需各位高手帮忙,非常感谢!!!!
[search]草莓[/search]
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
如果含有太多的杂志,肯定会影响PCR的
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
7楼2008-04-14 17:15:40
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查看全部 8 个回答

xiaoyur

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
很可能是多糖含量太多了
多糖太多影响rTaq酶的活性,有几个方法改进
1  在提取DNA时,提取缓冲中加无水乙醇至终浓度20%,可以降低多糖,但DNA含量会有所减少哦,不过做PCR是足够用了。
2  提取缓冲液加入PVP也可以降低多糖
3,如果提出来的DNA较多,DNA样品稀释5~50倍之后再做PCR
一定要加阳性质粒和清水对照,有内参基因更好,
祝你好运◎◎◎◎◎◎◎

[ Last edited by xiaoyur on 2008-4-13 at 22:52 ]
爱的反义词不是恨 而是冷漠!
2楼2008-04-13 22:50:58
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qiafeixn

木虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
把你提取的方法最好简要介绍一下,有可能是你鲜样太多;如果是采用离心的方法收集DNA的话,也可以考虑改为挑起核酸沉淀,用1~2mL冲洗液(75%乙醇,10mM乙酸铵)冲洗,室温下晾干
3楼2008-04-14 02:02:28
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qinying

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
降低多糖的方法很多,醋酸钠效果很好啊,使用材料也是应该考虑的问题
用新鲜叶片,使用老叶片百分之百提不出.
至于转米转进去基因,你现在DNA提取状态来看,还很难说啊
云在天边,水在瓶。
4楼2008-04-14 10:55:12
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