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seahzau

金虫 (小有名气)

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[交流] 提取的草莓叶片DNA呈粘稠状，为什么？影响PCR结果吗？谢谢！

最近小量法提取了转基因草莓叶片DNA进行PCR鉴定，发现DNA溶解后呈粘稠状，用枪都不易吸取来，请问是什么原因啊？因为含糖量过高吗？怎么解决啊？
但电泳检测，DNA带很明显，这种质量的DNA影响PCR鉴定结果吗？我共鉴定了70个转基因的草莓样品，都没有得到阳性的转基因植株，是DNA的问题还是确实外源基因没有转进去呢？急需各位高手帮忙，非常感谢！！！！
[search]草莓[/search]

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一不留神就容易迷失！

1楼 2008-04-13 21:14:51

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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

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★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖

如果含有太多的杂志，肯定会影响PCR的

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____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"

7楼2008-04-14 17:15:40

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xiaoyur

金虫 (著名写手)

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★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来

很可能是多糖含量太多了
多糖太多影响rTaq酶的活性，有几个方法改进
1 在提取DNA时，提取缓冲中加无水乙醇至终浓度20％，可以降低多糖，但DNA含量会有所减少哦，不过做PCR是足够用了。
2 提取缓冲液加入PVP也可以降低多糖
3，如果提出来的DNA较多，DNA样品稀释5～50倍之后再做PCR
一定要加阳性质粒和清水对照，有内参基因更好，
祝你好运◎◎◎◎◎◎◎

[ Last edited by xiaoyur on 2008-4-13 at 22:52 ]

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爱的反义词不是恨而是冷漠!

2楼2008-04-13 22:50:58

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