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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提取的草莓叶片DNA呈粘稠状，为什么？影响PCR结果吗？谢谢！
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seahzau

金虫 (小有名气)

[交流] 提取的草莓叶片DNA呈粘稠状，为什么？影响PCR结果吗？谢谢！

最近小量法提取了转基因草莓叶片DNA进行PCR鉴定，发现DNA溶解后呈粘稠状，用枪都不易吸取来，请问是什么原因啊？因为含糖量过高吗？怎么解决啊？
但电泳检测，DNA带很明显，这种质量的DNA影响PCR鉴定结果吗？我共鉴定了70个转基因的草莓样品，都没有得到阳性的转基因植株，是DNA的问题还是确实外源基因没有转进去呢？急需各位高手帮忙，非常感谢！！！！
[search]草莓[/search]
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一不留神就容易迷失！
1楼 2008-04-13 21:14:51
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xiaoyur

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
三楼的说得不错
y样品太多也不好
0.1到0.3g就可以
第二步可以找两个样剧烈震荡30秒比较一下
第四步加入十分之一上清液体积的醋酸钠（PH5.2）
最后DNA定容100ul～200ul溶解
你可以同时尝试不同的方面比较一下
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爱的反义词不是恨 而是冷漠!
8楼2008-04-14 17:54:57
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xiaoyur

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
很可能是多糖含量太多了
多糖太多影响rTaq酶的活性，有几个方法改进
1  在提取DNA时，提取缓冲中加无水乙醇至终浓度20％，可以降低多糖，但DNA含量会有所减少哦，不过做PCR是足够用了。
2  提取缓冲液加入PVP也可以降低多糖
3，如果提出来的DNA较多，DNA样品稀释5～50倍之后再做PCR
一定要加阳性质粒和清水对照，有内参基因更好，
祝你好运◎◎◎◎◎◎◎

[ Last edited by xiaoyur on 2008-4-13 at 22:52 ]
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爱的反义词不是恨 而是冷漠!
2楼2008-04-13 22:50:58
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qiafeixn

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
把你提取的方法最好简要介绍一下，有可能是你鲜样太多；如果是采用离心的方法收集DNA的话，也可以考虑改为挑起核酸沉淀，用1～2mL冲洗液（75%乙醇,10mM乙酸铵）冲洗，室温下晾干
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3楼2008-04-14 02:02:28
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qinying

木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
降低多糖的方法很多,醋酸钠效果很好啊,使用材料也是应该考虑的问题
用新鲜叶片,使用老叶片百分之百提不出.
至于转米转进去基因,你现在DNA提取状态来看,还很难说啊
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云在天边，水在瓶。
4楼2008-04-14 10:55:12
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