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prominetsun

金虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
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在线: 124.3小时
虫号: 1671710
注册: 2012-03-07
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 恳求各位大神支招，我快崩溃了！！！已有7人参与

各位虫友们，我是即将研二的新手，刚开始跟师兄做实验的时候，一切很顺利，PCR条带也很清晰，但是！过了一个月放假回来就不行了！怎么P都P不出来！！marker有条带，其余什么都没有了，样品就跟没添加过一样，放在紫外成像仪中什么都没有啊！！！为此我还做过对比试验，就是加新酶再做一遍，加新的dNTP再做一遍，但是都于事无补！！除了marker有条带什么都没有！！！现在实验处于停滞状态了，根本进行不下去。。。快哭了但是都不知道什么原因。。。照了其他实验室的PCR仪也没做出来。。。请问各位虫友有没有遇到过类似情况？非常希望大家能指点迷津！不然我就该急死了。。。
关于PCR:
我做的是 Pfu 酶的，片段长度在1.5 kb 左右，延伸时间一分半钟，流程为95°C解链，55℃退火，75℃延伸，无论配50u还是25u体系都没法P出来。。注意：我以前是可以P出来的。。。哭。。
各位大神，我最近两个月都浪费在上面了，无任何头绪，求各位的意见！要不就该被逼疯了。。。。。呜。。。。。呜。。。。

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1楼 2014-08-17 09:50:58

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prominetsun

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

14楼: Originally posted by vapordw at 2014-08-18 14:59:57
有么有考虑是PCR仪出问题了- - 整个实验室其他人P的结果都好好的么？
如果不是仪器问题，可能就是引物出问题了吧- -也许放假的时候停电，然后一个冰箱里的东西都化了了了了啦了

一个师兄P出来了但是条带较浅。。。我们实验室两台我都没P出来。。。去其他实验室做也没有。。。

[ 发自小木虫客户端 ]