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prominetsun

金虫 (正式写手)

[求助] 恳求各位大神支招,我快崩溃了!!! 已有7人参与

各位虫友们,我是即将研二的新手,刚开始跟师兄做实验的时候,一切很顺利,PCR条带也很清晰,但是!过了一个月放假回来就不行了!怎么P都P不出来!!marker有条带,其余什么都没有了,样品就跟没添加过一样,放在紫外成像仪中什么都没有啊!!!为此我还做过对比试验,就是加新酶再做一遍,加新的dNTP再做一遍,但是都于事无补!!除了marker有条带什么都没有!!!现在实验处于停滞状态了,根本进行不下去。。。快哭了但是都不知道什么原因。。。照了其他实验室的PCR仪也没做出来。。。请问各位虫友有没有遇到过类似情况?非常希望大家能指点迷津!不然我就该急死了。。。
关于PCR:
我做的是 Pfu 酶的,片段长度在1.5 kb 左右,延伸时间一分半钟,流程为95°C解链,55℃退火,75℃延伸,无论配50u还是25u体系都没法P出来。。注意:我以前是可以P出来的。。。哭。。
各位大神,我最近两个月都浪费在上面了,无任何头绪,求各位的意见!要不就该被逼疯了。。。。。呜。。。。。呜。。。。
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
prominetsun(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:36:59
可能是引物出现了问题,重新合成引物试试,或者是模板有问题~~~
4楼2014-08-17 11:15:25
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小松果2012

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
考虑引物吧,我师妹也正遇到这个问题呢。
2楼2014-08-17 10:27:03
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prominetsun

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小松果2012 at 2014-08-17 10:27:03
考虑引物吧,我师妹也正遇到这个问题呢。

难道所有引物都不行了?我最后验证还专门找了个之前好P的片段,跟我的引物是不同的。而且我的引物7月份刚到,现在就出问题了?。。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-08-17 10:30:49
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prominetsun

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ncuduhan at 2014-08-17 11:15:25
可能是引物出现了问题,重新合成引物试试,或者是模板有问题~~~

模板也是换了个之前不同的模板还是做不出来。。。。引物重新合成。。。?啊,那岂不是又要花钱请人做引物了。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-08-17 11:24:06
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