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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 琼脂扩散法相关问题
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

[求助] 琼脂扩散法相关问题 已有2人参与

各位哥哥姐姐，我用测抑菌活性，但是重复性差，不知道是什么原因。自己揣测除了跟我的发酵上清活性的稳定性有关外，可能跟琼脂浓度，指示菌浓度和上清液扩散有关，有以下三个问题想请教一下大虫们：
1、请问琼脂浓度跟抑菌效果是不是有关系？什么浓度最好呢？
2、指示菌是不是要控制一定OD值的浓度？
3、加入发酵上清液后我是放超净台吹干再放培养箱培养，你们是不是有吹干这步，或者直接正放着培养呢？

跪求啊，替我师妹发帖求救
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
1楼 2014-08-15 16:23:11
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wuyaping

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nl2016 at 2014-08-16 09:50:59
1、请问琼脂浓度跟抑菌效果是不是有关系？什么浓度最好呢？
——当然有关系，琼脂浓度15%-20%就好，最好重复试验都用同一批次的培养基较好！
2、指示菌是不是要控制一定OD值的浓度？
——指示菌没有必要控制OD值 ...

第三个问题的意思是我们往孔里面加完上清液后会把板放在超净工作台上吹干后再放到培养箱去培养（我们这样做主要是担心若上清液中有芽孢那么要是没吹干可能会在孔里长出菌来），请问你们是直接加了上清液就直接把板放到培养箱中培养吗？
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4楼2014-08-16 18:59:34
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nl2016

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
夏至1990: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2014-08-18 14:38:12
1、请问琼脂浓度跟抑菌效果是不是有关系？什么浓度最好呢？
——当然有关系，琼脂浓度15%-20%就好，最好重复试验都用同一批次的培养基较好！
2、指示菌是不是要控制一定OD值的浓度？
——指示菌没有必要控制OD值，但在加入培养基之前要控制适当的浓度，使抑菌圈比较好看！
3、加入发酵上清液后我是放超净台吹干再放培养箱培养，你们是不是有吹干这步，或者直接正放着培养呢？
——这里面描述的不详细，如果不同批次培养的发酵液可能也会有很大的区别。
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2楼2014-08-16 09:50:59
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
夏至1990: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2014-08-18 14:38:23
楼上的那位虫友人对前两个问题解释的已经够详细的，针对于第三个问题，以前实验室有个师弟做发酵液抑菌活性用的是牛津杯法，楼主不妨试一试
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没有比脚更长的路，没有比人更高的山
3楼2014-08-16 13:40:38
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nl2016

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
夏至1990: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2014-08-18 14:38:43
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuyaping at 2014-08-16 18:59:34
第三个问题的意思是我们往孔里面加完上清液后会把板放在超净工作台上吹干后再放到培养箱去培养（我们这样做主要是担心若上清液中有芽孢那么要是没吹干可能会在孔里长出菌来），请问你们是直接加了上清液就直接把板 ...

好吧，其实吹不吹干芽孢菌都会生长的，除非你用微孔滤膜过滤来排除活菌的干扰。如果要是细究的话，这里面就会有很多的问题：
1）平板培养基倒的厚薄会影响抑菌圈的大小；
2）刚倒的新鲜平板和倒过之后放置一段时间的平板抑菌圈大小差别较大；
3）不同的培养基可能会影响抑菌圈的大小；
4）指示菌的浓度可能会影响抑菌圈的大小；
5）培养液培养的时间长短会影响抑菌圈的大小；
...........
如果是芽孢杆菌，其可能的抑菌物质是抗菌肽类，可以设置一些对照试验，如热失活，蛋白酶处理等；不过这样的试验早就有人做了，不好玩！
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5楼2014-08-16 21:02:23
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