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求助：用间苯二酚法测植物蔗糖含量，为什么做标曲时不显色呢？ 已有2人参与
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求助：用间苯二酚法（参考张志良的实验书方法）测植物蔗糖含量，为什么做标曲时不显色呢？ 以下是我用的步骤，求大侠指导啊。。。 蔗糖提取与测定（采用间苯二酚法） 原理：酮糖在一定条件下和间苯二酚形成鲜红色，在480nm波长下可比色测定。在一定条件下，本反应为酮糖所特有，故可作为酮糖测定依据。将磨碎后的植物组织用80%乙醇抽提，该提取也可用来测定蔗糖。测定时先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖，然后用间苯二酚测定蔗糖中的果糖部分。色素对本实验影响大。 实验药品：2mol/LNaOH，30%HCI（10mol/L），蔗糖标准溶液（取已在80℃烘箱中烘至恒重的分析纯蔗糖100mg配成500ml溶液，即的200ug/ml标准溶液），0.1%间苯二酚溶液（0.1g间苯二酚溶于100ml 95%乙醇，置棕色瓶内保存。） 步骤：吸取可溶性糖提取液0.4ml，加入200ul 2mol/L NaOH，100℃煮沸5min，冷却后加入2.8ml 30%HCI，0.8ml 0.1%间苯二酚，摇匀，80℃水浴反应10min，冷却后在480nm处测定OD值，由标准曲线计算蔗糖含量。 取标准蔗糖溶液稀释成一系列0~100ug/ml（0、20、40、60、80、100）的不同浓度的溶液，按上述方法测OD值，绘制标准曲线。 我做标曲时，从加入200ul 2mol/L NaOH开始和从加入2.8ml 30%HCI这两种都试过，都显色不了，到底该怎么做呢？是蔗糖标准溶液浓度太低了吗？还是什么原因呢？ |
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