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求助:用间苯二酚法测植物蔗糖含量,为什么做标曲时不显色呢? 已有2人参与
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求助:用间苯二酚法(参考张志良的实验书方法)测植物蔗糖含量,为什么做标曲时不显色呢? 以下是我用的步骤,求大侠指导啊。。。 蔗糖提取与测定(采用间苯二酚法) 原理:酮糖在一定条件下和间苯二酚形成鲜红色,在480nm波长下可比色测定。在一定条件下,本反应为酮糖所特有,故可作为酮糖测定依据。将磨碎后的植物组织用80%乙醇抽提,该提取也可用来测定蔗糖。测定时先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖,然后用间苯二酚测定蔗糖中的果糖部分。色素对本实验影响大。 实验药品:2mol/LNaOH,30%HCI(10mol/L),蔗糖标准溶液(取已在80℃烘箱中烘至恒重的分析纯蔗糖100mg配成500ml溶液,即的200ug/ml标准溶液),0.1%间苯二酚溶液(0.1g间苯二酚溶于100ml 95%乙醇,置棕色瓶内保存。) 步骤:吸取可溶性糖提取液0.4ml,加入200ul 2mol/L NaOH,100℃煮沸5min,冷却后加入2.8ml 30%HCI,0.8ml 0.1%间苯二酚,摇匀,80℃水浴反应10min,冷却后在480nm处测定OD值,由标准曲线计算蔗糖含量。 取标准蔗糖溶液稀释成一系列0~100ug/ml(0、20、40、60、80、100)的不同浓度的溶液,按上述方法测OD值,绘制标准曲线。 我做标曲时,从加入200ul 2mol/L NaOH开始和从加入2.8ml 30%HCI这两种都试过,都显色不了,到底该怎么做呢?是蔗糖标准溶液浓度太低了吗?还是什么原因呢? |
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2楼2014-08-14 15:11:41
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我也出现这个问题了,你知道原因了吗 发自小木虫Android客户端 |
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