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水中月佳月影

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助:用间苯二酚法测植物蔗糖含量,为什么做标曲时不显色呢? 已有2人参与

求助:用间苯二酚法(参考张志良的实验书方法)测植物蔗糖含量,为什么做标曲时不显色呢?
  以下是我用的步骤,求大侠指导啊。。。

蔗糖提取与测定(采用间苯二酚法)
原理:酮糖在一定条件下和间苯二酚形成鲜红色,在480nm波长下可比色测定。在一定条件下,本反应为酮糖所特有,故可作为酮糖测定依据。将磨碎后的植物组织用80%乙醇抽提,该提取也可用来测定蔗糖。测定时先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖,然后用间苯二酚测定蔗糖中的果糖部分。色素对本实验影响大。

实验药品:2mol/LNaOH,30%HCI(10mol/L),蔗糖标准溶液(取已在80℃烘箱中烘至恒重的分析纯蔗糖100mg配成500ml溶液,即的200ug/ml标准溶液),0.1%间苯二酚溶液(0.1g间苯二酚溶于100ml 95%乙醇,置棕色瓶内保存。)

步骤:吸取可溶性糖提取液0.4ml,加入200ul 2mol/L NaOH,100℃煮沸5min,冷却后加入2.8ml 30%HCI,0.8ml 0.1%间苯二酚,摇匀,80℃水浴反应10min,冷却后在480nm处测定OD值,由标准曲线计算蔗糖含量。
取标准蔗糖溶液稀释成一系列0~100ug/ml(0、20、40、60、80、100)的不同浓度的溶液,按上述方法测OD值,绘制标准曲线。


我做标曲时,从加入200ul 2mol/L NaOH开始和从加入2.8ml 30%HCI这两种都试过,都显色不了,到底该怎么做呢?是蔗糖标准溶液浓度太低了吗?还是什么原因呢?
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非常感谢各位帮忙回帖出主意的朋友们,谢谢你们的热心帮忙~~
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lddmc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我做的果糖的标准曲线时也有同样的问题,后来换了sigma的标准品之后才显色,你要不试试换成sigma的标准品做。
3楼2014-09-23 17:38:46
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查看全部 8 个回答

lddmc

木虫 (正式写手)

同求,我用果糖做标准曲线也不显色,不知道是什么原因。
2楼2014-08-14 15:11:41
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像鱼一样飞吧

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lddmc at 2014-09-23 17:38:46
我做的果糖的标准曲线时也有同样的问题,后来换了sigma的标准品之后才显色,你要不试试换成sigma的标准品做。

sigma标准品是啥?百度不到诶
4楼2017-03-08 15:37:34
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像鱼一样飞吧

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我现在也在做蔗糖的标准曲线,也遇到和您一样的问题。首先是不显色,虽然不像测植物组织的时候一样显粉红色但是还是能测出OD值。其次,测出在(0-100微克每毫克)的OD 值太小不能和样品测定的值相近,于是我加大蔗糖浓度500微克每毫克,但是,出现沉淀且不稳定扫描,直接测定时是0.056,摇晃测定是0.189这样子,想问您现在问题解决了么,可以交流一下么
5楼2017-03-08 15:42:50
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