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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 农林综合 » 求助：用间苯二酚法测植物蔗糖含量，为什么做标曲时不显色呢？
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水中月佳月影

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助：用间苯二酚法测植物蔗糖含量，为什么做标曲时不显色呢？ 已有2人参与

求助：用间苯二酚法（参考张志良的实验书方法）测植物蔗糖含量，为什么做标曲时不显色呢？
  以下是我用的步骤，求大侠指导啊。。。

蔗糖提取与测定（采用间苯二酚法）
原理：酮糖在一定条件下和间苯二酚形成鲜红色，在480nm波长下可比色测定。在一定条件下，本反应为酮糖所特有，故可作为酮糖测定依据。将磨碎后的植物组织用80%乙醇抽提，该提取也可用来测定蔗糖。测定时先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖，然后用间苯二酚测定蔗糖中的果糖部分。色素对本实验影响大。

实验药品：2mol/LNaOH，30%HCI（10mol/L），蔗糖标准溶液（取已在80℃烘箱中烘至恒重的分析纯蔗糖100mg配成500ml溶液，即的200ug/ml标准溶液），0.1%间苯二酚溶液（0.1g间苯二酚溶于100ml 95%乙醇，置棕色瓶内保存。）

步骤：吸取可溶性糖提取液0.4ml，加入200ul 2mol/L NaOH，100℃煮沸5min，冷却后加入2.8ml 30%HCI，0.8ml 0.1%间苯二酚，摇匀，80℃水浴反应10min，冷却后在480nm处测定OD值，由标准曲线计算蔗糖含量。
取标准蔗糖溶液稀释成一系列0~100ug/ml（0、20、40、60、80、100）的不同浓度的溶液，按上述方法测OD值，绘制标准曲线。


我做标曲时，从加入200ul 2mol/L NaOH开始和从加入2.8ml 30%HCI这两种都试过，都显色不了，到底该怎么做呢？是蔗糖标准溶液浓度太低了吗？还是什么原因呢？
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非常感谢各位帮忙回帖出主意的朋友们，谢谢你们的热心帮忙~~
1楼 2014-08-07 22:18:56
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lddmc

木虫 (正式写手)
同求，我用果糖做标准曲线也不显色，不知道是什么原因。
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2楼2014-08-14 15:11:41
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lddmc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我做的果糖的标准曲线时也有同样的问题，后来换了sigma的标准品之后才显色，你要不试试换成sigma的标准品做。
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3楼2014-09-23 17:38:46
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像鱼一样飞吧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lddmc at 2014-09-23 17:38:46
我做的果糖的标准曲线时也有同样的问题，后来换了sigma的标准品之后才显色，你要不试试换成sigma的标准品做。

sigma标准品是啥？百度不到诶
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4楼2017-03-08 15:37:34
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像鱼一样飞吧

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，我现在也在做蔗糖的标准曲线，也遇到和您一样的问题。首先是不显色，虽然不像测植物组织的时候一样显粉红色但是还是能测出OD值。其次，测出在（0-100微克每毫克）的OD 值太小不能和样品测定的值相近，于是我加大蔗糖浓度500微克每毫克，但是，出现沉淀且不稳定扫描，直接测定时是0.056，摇晃测定是0.189这样子，想问您现在问题解决了么，可以交流一下么
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5楼2017-03-08 15:42:50
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痛苦的科研狗

新虫 (初入文坛)
★
晋鹏: 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-10-09 21:30:51
水中月佳月影(晋鹏代发): 金币+1, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-10-10 19:47:25
引用回帖:
5楼: Originally posted by 像鱼一样飞吧 at 2017-03-08 15:42:50
你好，我现在也在做蔗糖的标准曲线，也遇到和您一样的问题。首先是不显色，虽然不像测植物组织的时候一样显粉红色但是还是能测出OD值。其次，测出在（0-100微克每毫克）的OD 值太小不能和样品测定的值相近，于是我加 ...

我也出现这个问题了，你知道原因了吗

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6楼2017-10-09 20:48:59
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实验小白!

新虫 (初入文坛)
我想测蔗糖合成酶，按指导书上用间苯二酚法测蔗糖，标准曲线不显得，样品显色但是OD值重复的不好，想知道你们后来是怎么解决的啊

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7楼2018-03-13 16:24:36
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实验小白!

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 痛苦的科研狗 at 2017-10-09 20:48:59
我也出现这个问题了，你知道原因了吗
...

我也出现这个问题，你们知道原因了么

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8楼2018-03-13 22:34:53
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