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自己设计了一对较完美的引物，为什么却始终跑不出条带呢？ 已有7人参与
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| 前段时间，我在Primer上设计的引物，上游为：5-GATGTAGTTATGGTGCTTAGACGC-3.下游引物：5-ACGAACCAGCCATTGACG-3，引物合成单上显示上游引物TM值为55.7度，下游因为TM值为50.9度。我设置的温度梯度从43℃~60℃，但均未跑出条带。但用我同学在同一毒株上设计的引物则能跑出条带。能排除的原因我都排除了，现在真不知道问题出在哪里？恳请各位亲帮我分析分析，提提建议，我实在没有办法了！我在此谢谢大家了！ |
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最近PCR也没跑出来，快崩了，在丁香园求助，一个星期都没人理。 提取的BMSCs细胞RNA，目的基因VEGF，跑了几次PCR都没有条带，借用已知没问题的CDNA来PCR，紫外下看不到条带，上机后条带如下： 胶没配好，所有MARKER不清楚，左右5个条带是两种CDNA的条带，设计了梯度退火温度，从左到右退火温度48-58.虽然不清楚，单确实是300左右目的基因的条带。 怀疑自己提的RNA及CDNA有问题，所以又跑了RNA电泳。如下图： 请问最前面模糊的条带是5s吗？最近的条带是DNA污染？RNA质量如何？ 另：为什么借用CDNA来PCR，跨度10度的退火温度，PCR条带仍然没什么变化？仍然很淡？怎么调整？ 多谢！  已知CDNA后PCR图.jpg  6-10RNA.jpg |
22楼2014-08-08 11:16:34
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至尊木虫 (知名作家)
Translator and Proofreader
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2楼2014-08-06 07:47:08
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4楼2014-08-06 10:47:10
