24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 236.5
帖子: 68
在线: 36.6小时
虫号: 2574960
注册: 2013-07-31

[求助] 自己设计了一对较完美的引物，为什么却始终跑不出条带呢？已有7人参与

前段时间，我在Primer上设计的引物，上游为：5-GATGTAGTTATGGTGCTTAGACGC-3.下游引物：5-ACGAACCAGCCATTGACG-3，引物合成单上显示上游引物TM值为55.7度，下游因为TM值为50.9度。我设置的温度梯度从43℃~60℃，但均未跑出条带。但用我同学在同一毒株上设计的引物则能跑出条带。能排除的原因我都排除了，现在真不知道问题出在哪里？恳请各位亲帮我分析分析，提提建议，我实在没有办法了！我在此谢谢大家了！

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2014-08-06 07:40:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

guang0ying

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
帖子: 2
在线: 28分钟
虫号: 3357489
注册: 2014-08-08

最近PCR也没跑出来，快崩了，在丁香园求助，一个星期都没人理。

提取的BMSCs细胞RNA，目的基因VEGF，跑了几次PCR都没有条带，借用已知没问题的CDNA来PCR，紫外下看不到条带，上机后条带如下：

胶没配好，所有MARKER不清楚，左右5个条带是两种CDNA的条带，设计了梯度退火温度，从左到右退火温度48-58.虽然不清楚，单确实是300左右目的基因的条带。
怀疑自己提的RNA及CDNA有问题，所以又跑了RNA电泳。如下图：

请问最前面模糊的条带是5s吗？最近的条带是DNA污染？RNA质量如何？
另：为什么借用CDNA来PCR，跨度10度的退火温度，PCR条带仍然没什么变化？仍然很淡？怎么调整？
多谢！