应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠PCR
53/1返回列表
查看: 2505  |  回复: 38
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] 重叠PCR 已有8人参与

做重叠PCR，最后一步怎么也合不到一起，两个片段一个三百多一个四百多。做了各种梯度，touch down等，出来目的条带，但是非常淡，而且靠近一百左右有一条小带。希望有经验的朋友帮忙。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-07-31 09:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by leonaliu2013 at 2014-08-01 10:56:48
重叠PCR引物特别重要，我同时做四个片段，两两重叠，有两个一次就成功了，另外两个一个多月了，还融不上。就是引物特异性不好

我之前做的两两重叠很顺利，就最后一步P出来的很淡，现在正根据虫友们的意见调整呢 ，不知道你片段大小，我之前的都是一百到四百，有的一次出来了，有的把模板稀释或者减少模板和引物量也出来了。
赞一下 回复此楼
22楼2014-08-01 11:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 39 个回答

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-31 14:00:29
应该是做overlap PCR吧？不知道你overlap的序列多长？模板浓度如何？另外，100bp左右的条带如果是一坨，可能是引物。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-07-31 09:30:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-07-31 09:30:06
应该是做overlap PCR吧？不知道你overlap的序列多长？模板浓度如何？另外，100bp左右的条带如果是一坨，可能是引物。

嗯，是的，序列大概在750左右，模板浓度没有测过，但是能清晰的看到，也不低，我觉得也是引物，现在是尝试各种都不行，P出来的条带都很暗
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-31 09:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-31 20:21:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-07-31 09:43:34
嗯，是的，序列大概在750左右，模板浓度没有测过，但是能清晰的看到，也不低，我觉得也是引物，现在是尝试各种都不行，P出来的条带都很暗...

如果PCR不好弄，可以增加overlap的长度，直接把两个小片段连到一起；或者以较弱的目的片段（750bp）的基础上再一次尝试扩增，反正750bp不容易产生突变。
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-31 11:32:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 39 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭