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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 原核表达
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

[求助] 原核表达 已有2人参与

请问各位大神，我是做原核表达上游也就是负责蛋白的表达，在做小试的时候 4ml LB培养基+200ul菌液，0.5mMIPTG，做两个温度，20℃，37℃。出来的结果是20℃有表达。在扩大培养的时候，按照小试的条件20℃培养，可是结果就是没有表达，试了好几次都不成功，为了防止是其表达量小，把收集的菌体试着让纯化的同事的做了下，确实木有蛋白呀！真的不知道了，求助~~~~~
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1楼 2014-07-30 20:52:45
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我要睡觉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-02 12:10:38
表达不稳定，很正常。
首先，蛋白有无毒性？
第二 貌似装液过多，一般发酵摇瓶，不要超过总体积的30%

蛋白没有毒性 之前做出来过 装液量由800ml改成了400ml，结果等待中~~~~~~~
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7楼2014-08-09 10:20:59
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小苹果168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有的蛋白原核表达不了，可以选择真核表达

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-07-30 21:00:22
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我要睡觉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小苹果168 at 2014-07-30 21:00:22
有的蛋白原核表达不了，可以选择真核表达

可是小试有表达吖，到了扩大培养就就没有了
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3楼2014-07-31 22:03:50
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 我要睡觉 at 2014-07-31 22:03:50
可是小试有表达吖，到了扩大培养就就没有了...

扩大培养的时候，用大点的容器去摇，再微调下摇速吧
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4楼2014-08-01 10:50:03
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