应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有表达活性，但量不足，不足以发现特异带，你们一般怎么处理？
111/2返回列表12下一页
查看: 1113  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 有表达活性，但量不足，不足以发现特异带，你们一般怎么处理？ 已有4人参与

请教一下：有表达活性，但是可能量不足，不足以发现特异带，你们一般怎么处理？文章中如何解释？还是不附蛋白电泳图？还是纯化或者其他办法？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-07-28 18:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-29 10:13:28
是什么表达？原核表达吗？
把温度提高到37度 转速提高 iptg浓度提高 诱导时间增加 试试看 一般用pET的系统表达量都非常高啊
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-28 19:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
charles08(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-29 10:13:32
可以纯化一下，我做个一个蛋白， 活性很高，用试剂盒可以检测，但是就是看不到特异性明显的条带。 但是有HIs纯化发现特别纯98%以上的样子，你确定有活性的话可以试试
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2014-07-28 21:07:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-07-29 10:13:40
最简单的方法就是把你的酶液装到透析袋里在透析袋外面撒一层PEG20000把你的酶液浓缩一下就行了。但如果是菌体破碎后的胞内蛋白不适合直接浓缩，可以用亲和纯化一下，但是如果你的蛋白太少亲和也比较费劲。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
4楼2014-07-28 21:49:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-07-28 19:59:55
是什么表达？原核表达吗？
把温度提高到37度 转速提高 iptg浓度提高 诱导时间增加 试试看 一般用pET的系统表达量都非常高啊

是原核表达，我的测定值比较好，但是一直看不到特征蛋白带，不知何故？怎样才能让特征目的带带明显

诱导条件已经优化了
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-29 08:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 475502411 at 2014-07-28 21:07:36
可以纯化一下，我做个一个蛋白， 活性很高，用试剂盒可以检测，但是就是看不到特异性明显的条带。 但是有HIs纯化发现特别纯98%以上的样子，你确定有活性的话可以试试

准备纯化一下的，只是貌似实验好麻烦啊，看看有无别的办法，让特异蛋白带显现出来

我的测定值也很高
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-29 08:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 475502411 at 2014-07-28 21:07:36
可以纯化一下，我做个一个蛋白， 活性很高，用试剂盒可以检测，但是就是看不到特异性明显的条带。 但是有HIs纯化发现特别纯98%以上的样子，你确定有活性的话可以试试

看原来有些微生物学报的 文章蛋白图片都没有配额，跑了好多次，都不想跑了
赞一下 回复此楼
7楼2014-07-29 08:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-28 21:49:41
最简单的方法就是把你的酶液装到透析袋里在透析袋外面撒一层PEG20000把你的酶液浓缩一下就行了。但如果是菌体破碎后的胞内蛋白不适合直接浓缩，可以用亲和纯化一下，但是如果你的蛋白太少亲和也比较费劲。

需要大量样品诱导后再做亲和吧？
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-29 08:34:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by charles08 at 2014-07-29 08:34:25
需要大量样品诱导后再做亲和吧？...

如果是E coli诱导的蛋白，你还是尝试着优化下诱导条件吧。你的目的蛋白越多后期越好纯化。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
9楼2014-07-29 11:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
WESTERN BLOT 就可以看到特异条带了
赞一下 回复此楼
Neversaygoodbye
10楼2014-07-29 12:55:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 charles08 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭