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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何鉴定一种DNA样本中的不同样本类型所占百分比
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linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-29 14:25:43
这个难度就比较大了，这玩意可以确定拷贝数，但技术要求比较高...

恩恩，这个我也稍微看了一下，感觉定量手段和荧光PCR差不太多，而且我这个整体只有一个点不一样，剩下的都一样，估计也没法用电泳给他们两个跑开
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11楼2014-07-29 15:43:37
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nishuoshisa

银虫 (著名写手)
帮你顶。。。。。。
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轻轻地来，轻轻地走，挥一挥衣袖，带走了一些金币。
12楼2014-07-29 16:00:39
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linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by nishuoshisa at 2014-07-29 16:00:39
帮你顶。。。。。。

谢谢
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13楼2014-07-29 16:15:03
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by linzshit at 2014-07-29 15:39:06
是只有一个突变，然后向通过两种酶切把两种分开，上面是酶切示意图，我也觉得是不能直接比较，但实在是没啥好方法了，当然这个也没成功，哈哈
绝对定量是找个标准品分别对比吗？双标准曲线法不太能理解...

双标准曲线是我自己想的，我觉得通过标准曲线得到准确的扩增效率，通过校正(1+E)^CT后再除以扩增片段长度，也可以得到相同的效果，当然两个引物需要手动设置相同的阈值
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14楼2014-07-31 10:37:10
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linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-07-31 10:37:10
双标准曲线是我自己想的，我觉得通过标准曲线得到准确的扩增效率，通过校正(1+E)^CT后再除以扩增片段长度，也可以得到相同的效果，当然两个引物需要手动设置相同的阈值...

这种的我也试过，甚至试过通过最后的峰高、Ct值、扩增效率去推算初始模板量，不过感觉出入还是挺大的。
我想两种质粒的话一个点突变的区别，通过定量得到浓度然后去混合，这种混合结果应该是普遍被认可是正确的吧，如果是可以考虑说服上层不进行验证了，毕竟Qpcr也不一定能达到这种检测精度。
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15楼2014-07-31 11:10:07
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by linzshit at 2014-07-31 11:10:07
这种的我也试过，甚至试过通过最后的峰高、Ct值、扩增效率去推算初始模板量，不过感觉出入还是挺大的。
我想两种质粒的话一个点突变的区别，通过定量得到浓度然后去混合，这种混合结果应该是普遍被认可是正确的吧 ...

我也有过这种需求，所以当初也想了一些办法，最后还是放弃了，我是发现了某基因的两种转录本，也是SNP的差别，想确定他们之间拷贝数的比值
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16楼2014-07-31 13:07:10
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linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-07-31 13:07:10
我也有过这种需求，所以当初也想了一些办法，最后还是放弃了，我是发现了某基因的两种转录本，也是SNP的差别，想确定他们之间拷贝数的比值...

看来这个目前还是空白啊，我翻了好多文献也没看见，感觉要拿诺贝尔奖了
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17楼2014-08-04 09:14:38
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by linzshit at 2014-08-04 09:14:38
看来这个目前还是空白啊，我翻了好多文献也没看见，感觉要拿诺贝尔奖了...

我也有这样的问题，不知道测序可不可以呢，或者飞行质谱？这也是从华大客服那问来的，希望多交流
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
18楼2015-01-27 09:15:58
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