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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 奇怪测序结果
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wangtailin

银虫 (小有名气)

[求助] 奇怪测序结果 已有2人参与

同一基因，同一引物，匹出两条带，放入pEASY 载体，筛选阳性后送测序，结果为啥差异这么大呢，求大师解答？

奇怪测序结果
测序比对.png
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学习着提升自己
1楼 2014-07-26 16:00:55
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wangtailin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-27 20:21:52
1.你的前两个测序结果没有去除载体序列吧，你载体上连了多大的片段？
2.第三段序列是你的目的序列吗？

2000的marker，第三个是目的序列，只知道一小段，做的是5’端的race,
条带用的是普通酶匹的
奇怪测序结果-1
image002.jpg
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学习着提升自己
12楼2014-07-27 21:29:49
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wangtailin

银虫 (小有名气)
应该是完全比对的上啊，测序应该不出错，很奇怪的问题，后面一部分也是对不上，咋回事呢？
奇怪测序结果-2
比对.png
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学习着提升自己
2楼2014-07-26 17:09:15
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-26 19:18:04
你用于比对的这两条序列是啥~？你不是根据已知基因设计引物扩增出来大小不同的两条序列吗？那这两条序列和你的已知基因序列的比对结果如何，你上面的应该是你两条测序结果间的比对吧，关键看和已知基因的比对结果。你做个多序列比对看看。
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大家相互帮助哈
3楼2014-07-26 17:18:52
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wangtailin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-26 17:18:52
你用于比对的这两条序列是啥~？你不是根据已知基因设计引物扩增出来大小不同的两条序列吗？那这两条序列和你的已知基因序列的比对结果如何，你上面的应该是你两条测序结果间的比对吧，关键看和已知基因的比对结果。 ...

我做的是RACE，和已知比对只有一条和原来的比对成功，另一条不行，比对不上；但是两条测序结果却又很大的重复！
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学习着提升自己
4楼2014-07-26 21:05:12
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