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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 测得序列基因已导入大肠杆菌，为什么诱导后产生的蛋白与所求蛋白不一致？
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qinglongwang

新虫 (小有名气)

[交流] 测得序列基因已导入大肠杆菌，为什么诱导后产生的蛋白与所求蛋白不一致？ 已有4人参与

测得序列基因已导入大肠杆菌，为什么诱导后，电泳得到蛋白与所求蛋白不一致？是诱导方法不对？
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1楼 2014-07-23 20:37:38
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qinglongwang

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-24 03:01:31
4.楼主诱导大肠杆菌表达的蛋白质不是导入的目的基因的蛋白质产物，至少楼主提取到的所谓的目的基因的蛋白质产物实际上是别的蛋白质。
5.楼主导入大肠杆菌的目的基因可能没有以正确 的 ORF 表达，仅仅测定DNA序列不 ...

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2014-07-24 08:06:06
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
纯化了吗，还是测活性了，，western了吗？仅仅从大小有时候看不出问题的
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-07-23 21:16:47
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qinglongwang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-23 21:16:47
纯化了吗，还是测活性了，，western了吗？仅仅从大小有时候看不出问题的

没有纯化，也没有测得活性，只是根据电泳表现出蛋白30kD,而根据基因表达预测大小应该在20kD多一点点
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-07-23 21:52:56
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
载体构建好后测序验证了吗？有可能发生移码突变或碱基突变导致翻译提前终止或未正常终止。
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-23 22:43:26
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