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qinglongwang

新虫 (小有名气)

[交流] 测得序列基因已导入大肠杆菌,为什么诱导后产生的蛋白与所求蛋白不一致? 已有4人参与

测得序列基因已导入大肠杆菌,为什么诱导后,电泳得到蛋白与所求蛋白不一致?是诱导方法不对?
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
4.楼主诱导大肠杆菌表达的蛋白质不是导入的目的基因的蛋白质产物,至少楼主提取到的所谓的目的基因的蛋白质产物实际上是别的蛋白质。
5.楼主导入大肠杆菌的目的基因可能没有以正确 的 ORF 表达,仅仅测定DNA序列不能保证一段基因片段的启动子和终止子就一定是目的基因以正确的ORF 表达时该有的位点,很可能发生了ORF 改变,至少是启动子和终止子,这样的改变可能发生在转录水平和翻译水平上。仅仅是基因序列导入了载体,不能保证基因序列在转录和翻译时不发生改变。

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7楼2014-07-24 03:01:31
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
纯化了吗,还是测活性了,,western了吗?仅仅从大小有时候看不出问题的
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-07-23 21:16:47
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qinglongwang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-07-23 21:16:47
纯化了吗,还是测活性了,,western了吗?仅仅从大小有时候看不出问题的

没有纯化,也没有测得活性,只是根据电泳表现出蛋白30kD,而根据基因表达预测大小应该在20kD多一点点
3楼2014-07-23 21:52:56
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
载体构建好后测序验证了吗?有可能发生移码突变或碱基突变导致翻译提前终止或未正常终止。
4楼2014-07-23 22:43:26
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