24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3287  |  回复: 20
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 菌液pcr,坐等求助 已有7人参与

今天做的菌液pcr,三个基因挑了48个单克隆,做菌液pcr,引物是M13通用引物,出来的目的条带都是250bp。750bp。目的片段是500bp。怎么回事?只能证明没有连接上吗?
回复此楼
踏实
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-24 04:24:05
举例来说,pGEM-T载体的T7(上游引物)和SP6(下游引物)相隔大概有150bp,所以如果用这对引物的话,得到的产物肯定是大于你的目的基因的。
定向PCR的方法是:假设你需要你的目的基因ORF和载体是同向,那么你可以 ...

为什么之前菌液PCR出来的直接是目的条带

[ 发自小木虫客户端 ]
踏实
13楼2014-07-24 10:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

lijianfu12

银虫 (正式写手)

你用自己的引物跑p呀!干嘛用m13

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
2楼2014-07-23 21:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡亚梅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:31:32
引物特异性不行啊,建议自己根据目的条带设计会更靠谱一些
小虫虫~~
3楼2014-07-23 21:40:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:31:40
做阴性对照了吗?用的是什么T载体?查下通用引物之间的距离。
应该是连接转化成功了,M13通用引物扩增空载体的产物大小一般是200bp左右。这样加上你的目的片段大小应该就是对的。
4楼2014-07-23 22:23:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +16 花田半亩~白 2026-04-21 16/800 2026-04-23 03:04 by 魅力紫翼
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
请填处理意见