| 查看: 1437 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
linshangyan铁虫 (小有名气)
|
[求助]
轮状病毒RNA提取的原理，能讲讲各个步骤的目的么？？？已有2人参与
|
||
|
1.吸取0.25 mlmL供试品，加入加至1.5 mlmL离心管中，再加入0.25 ml mL2%SDS-0.2M醋酸缓冲液，扣上管盖。用手轻轻颠倒混匀30秒或将旋涡振荡器开到第1档震荡30秒。 2.立即加入0.5 mlmL的Tris-饱和酚，扣上管盖。用手轻轻颠倒混匀30秒。 3.用台式高速冷冻离心机进行离心，设定转速为10000 rpm，离心时间5 min分钟。离心时温度最好不要高于10℃。 4.离心后样品溶液呈三层，用枪头吸出最上层的上清液，约400 μlL。注意不要吸到中间的蛋白层。 5.将上清液放入离心管中，加入800 μlL低温无水乙醇，混匀，放置于-40℃冰箱中过夜。 6.从冰箱中取出样品，用台式高速冷冻离心机进行离心，设定转速10000rpm，离心5min。离心过程中温度最好不要高于10℃。 |
回复此楼» 猜你喜欢
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有7人回复
-
压汞仪和BET测气凝胶孔隙率
已经有4人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有14人回复
-
博士申请
已经有3人回复
-
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有13人回复
-
氨基封端PDMS和HDI反应快速固化
已经有11人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有11人回复
-
论文投稿求助
已经有4人回复
-
Applied Surface Science 这个期刊。有哪位虫友投过的能把word模板发给我参考一下嘛
已经有3人回复
-
投稿精细化工
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 动物组织冻存，做PCR和western，以及提取RNA和蛋白步骤
已经有3人回复
- RNA提取TRIZOL法最关键的注意步骤是什么
已经有18人回复
junjieshao
禁虫 (小有名气)
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2020-06-20 05:23:55
angelsmile335
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 174.4
- 散金: 200
- 红花: 16
- 帖子: 204
- 在线: 215.8小时
- 虫号: 466840
- 注册: 2007-11-24
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
2楼2014-07-30 04:01:14
【答案】应助回帖
|
BIOG病毒RNA提取步骤： 1.取出析出液和洗涤液，按以下操作： a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。 b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。 c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。 2.样本处理：a) 拭子：向无RNA酶的1.5mL离心管中加入800μL生理盐水，将拭子收集的样本置于生理盐水中，涮洗20秒，使细胞完全脱落，贴离心管壁挤干拭子上的液体，12,000 rpm 离心5 min，弃700μL上清，剩余100μL上清，充分振荡混匀。 3.加入200μL 裂解液和20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴10 分钟。 4.加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。 5.将吸附柱放入收集管内，将上述溶液吸入吸附柱内，静置2 min，12,000 rpm 4℃离心1 min，弃收集管内废液。 6.将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，静置2 min，12,000 rpm 4℃离心1 min，弃收集管内废液。 7.将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 min，离去残留的洗涤液。 8.取出吸附柱，放入新的1.5 mL无RNA酶离心管内，加入30-50 μL 洗脱液，静置3 min，12,000 rpm 4℃ 离心2 min，收集RNA溶液。 9.-70℃保存，或直接用于下一步实验。 |
3楼2020-06-15 09:46:40