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linshangyan铁虫 (小有名气)
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[求助]
轮状病毒RNA提取的原理，能讲讲各个步骤的目的么？？？ 已有2人参与
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1.吸取0.25 mlmL供试品，加入加至1.5 mlmL离心管中，再加入0.25 ml mL2%SDS-0.2M醋酸缓冲液，扣上管盖。用手轻轻颠倒混匀30秒或将旋涡振荡器开到第1档震荡30秒。 2.立即加入0.5 mlmL的Tris-饱和酚，扣上管盖。用手轻轻颠倒混匀30秒。 3.用台式高速冷冻离心机进行离心，设定转速为10000 rpm，离心时间5 min分钟。离心时温度最好不要高于10℃。 4.离心后样品溶液呈三层，用枪头吸出最上层的上清液，约400 μlL。注意不要吸到中间的蛋白层。 5.将上清液放入离心管中，加入800 μlL低温无水乙醇，混匀，放置于-40℃冰箱中过夜。 6.从冰箱中取出样品，用台式高速冷冻离心机进行离心，设定转速10000rpm，离心5min。离心过程中温度最好不要高于10℃。 |
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【答案】应助回帖
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BIOG病毒RNA提取步骤： 1.取出析出液和洗涤液，按以下操作： a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。 b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。 c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。 2.样本处理：a) 拭子：向无RNA酶的1.5mL离心管中加入800μL生理盐水，将拭子收集的样本置于生理盐水中，涮洗20秒，使细胞完全脱落，贴离心管壁挤干拭子上的液体，12,000 rpm 离心5 min，弃700μL上清，剩余100μL上清，充分振荡混匀。 3.加入200μL 裂解液和20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴10 分钟。 4.加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。 5.将吸附柱放入收集管内，将上述溶液吸入吸附柱内，静置2 min，12,000 rpm 4℃离心1 min，弃收集管内废液。 6.将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，静置2 min，12,000 rpm 4℃离心1 min，弃收集管内废液。 7.将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 min，离去残留的洗涤液。 8.取出吸附柱，放入新的1.5 mL无RNA酶离心管内，加入30-50 μL 洗脱液，静置3 min，12,000 rpm 4℃ 离心2 min，收集RNA溶液。 9.-70℃保存，或直接用于下一步实验。 |
3楼2020-06-15 09:46:40
angelsmile335
铜虫 (小有名气)
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2楼2014-07-30 04:01:14
junjieshao
禁虫 (小有名气)
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4楼2020-06-20 05:23:55
