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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 物理 » 原子、分子&光学 » 关于荧光比色皿的问题
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suimu

金虫 (小有名气)

[求助] 关于荧光比色皿的问题 已有1人参与

如题，我在做荧光光谱实验的时候，如果采用不同光程的比色皿，做出来的结果差异很大，我用10mm*10mm做的荧光峰在390/490,如果用1mm*10mm的做的荧光峰在360/436,我做的体系浓度比较高，我怀疑是内滤效应的影响，怎样消除内滤效应的影响？
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1楼 2014-07-20 10:26:19
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nkwzh

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
suimu: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-07-24 20:49:59
这个应该是高浓度下典型的自吸收效应（或者你所说的内滤）造成的，如果荧光效率较高，还会有再发射效应，我们之前专门写了篇文章讨论，有兴趣可以看看。Chin. Phys. B 22,113301(2013) 除了降低试剂的浓度，实验上似乎没有更好的方式，理论上除非用我们给的推导进行逆推理，我进行了一些尝试，但涉及的实验参数不可预测，所以没有再做下去了。
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2楼2014-07-22 08:36:02
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suimu

金虫 (小有名气)
那按我的理解，也就是说，如果A荧光分子250激发，350发射，它发射的350nm荧光会被B荧光分子（假设B荧光分子350可以有效激发，发射480nm）吸收，那B荧光分子会吸收有A荧光分子的350nm而发射480nm的荧光，造成A荧光分子光强减弱，B荧光分子强度得到增强，这样理解有问题吗？
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3楼2014-07-24 20:49:27
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suimu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nkwzh at 2014-07-22 08:36:02
这个应该是高浓度下典型的自吸收效应（或者你所说的内滤）造成的，如果荧光效率较高，还会有再发射效应，我们之前专门写了篇文章讨论，有兴趣可以看看。Chin. Phys. B 22,113301(2013) 除了降低试剂的浓度，实验上似 ...

论文可以给我发一份吗，我拜读一下
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4楼2014-07-24 20:52:41
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nkwzh

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by suimu at 2014-07-24 20:49:27
那按我的理解，也就是说，如果A荧光分子250激发，350发射，它发射的350nm荧光会被B荧光分子（假设B荧光分子350可以有效激发，发射480nm）吸收，那B荧光分子会吸收有A荧光分子的350nm而发射480nm的荧光，造成A荧光分 ...

这个是另外的问题了吧，这个属于分子间能量转移的范畴了，如果你说的A和B是同一种分子，由于无辐射跃迁通道的存在，最终被接收到的荧光要比没有荧光自吸收效应时要弱，而且由于吸收和荧光光谱的差别，一般短波被吸收的较多，长波可能都不会被吸收，从发射光谱上看整个谱线都会改变，荧光峰会发生红移。
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5楼2014-07-25 09:31:06
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nkwzh

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by suimu at 2014-07-24 20:52:41
论文可以给我发一份吗，我拜读一下...

你可以直接下载的吧，如果不行，给我留个邮箱。
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6楼2014-07-25 09:32:36
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suimu

金虫 (小有名气)
内滤效应本质上不能看做分子间能量转移吗，A分子产生的荧光被后面的其他分子吸收，只不过吸收不一定有荧光产生，大多以非辐射跃迁的形式回到基态，但还是属于能量转移吧？
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7楼2014-07-25 10:30:43
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艾可赛艇

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nkwzh at 2014-07-22 08:36:02
这个应该是高浓度下典型的自吸收效应（或者你所说的内滤）造成的，如果荧光效率较高，还会有再发射效应，我们之前专门写了篇文章讨论，有兴趣可以看看。Chin. Phys. B 22,113301(2013) 除了降低试剂的浓度，实验上似 ...

你好，请问你做的实验中，有没有证实溶液浓度低于多少时可以不考虑内滤效应？
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8楼2017-04-28 19:33:08
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